儿童B系急性淋巴细胞性白血病CD133-2的生物学特性及其分子机制初步研究

发布时间：2017-08-02 13:23

  本文关键词：儿童B系急性淋巴细胞性白血病CD133-2的生物学特性及其分子机制初步研究

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【摘要】：目的：探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）作为干细胞标志物表达的意义及其作用的分子机制，从而明确CD133-2是否为儿童B-ALL的白血病干细胞（LSC）标志，也为进一步研究儿童B-ALL的分子发病机制奠定实验基础。 方法： 1、流式细胞术检测初诊和复发儿童B-ALL（共38例，包含初诊34例，复发4例）骨髓单个核细胞（BM-MNCs）CD133-2的表达（IgG1-PE为同型对照），并采集5例CD133-2阳性表达(比例≥20%)的B-ALL患儿（初诊4例，复发1例）BM-MNCs，免疫磁珠分选法（MACS）分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，体外甲基纤维素半固体集落培养（包含SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO等成分），观察各亚群集落形成能力，并对培养后形成的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色做形态学鉴定。 2、6例CD133-2表达阳性的B-ALL（初诊4例，复发2例）患儿BM-MNCs中MACS分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，以CD133-2+CD19-亚群细胞为实验组，CD133-2-CD19+亚群细胞为对照组，采用Real-time PCR法和基因芯片试剂盒，分析与TGF-β信号通路相关的84个基因分子在以上两群细胞中的表达差异。 结果： 1、流式细胞仪检测结果显示：38例儿童B-ALL中，， CD133-2的阳性表达率为60.5%（比例≥20%为表达阳性）。其中5例儿童B-ALL的BM-MNCs经MACS分选纯化后，体外甲基纤维素半固体集落培养14天，CD133-2+CD19-细胞群在第5天出现红系集落，第7天后出现混合集落，第10天时集落较第5天增长10倍，增长速度明显加快，第12天时集落状态良好，第14天后集落未再增加。对生长状态良好的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色，CD133-2+CD19-形成的集落中可见红系、粒系、巨噬和单核系细胞。其他亚群形成集落不明显。比较各亚群细胞集落形成方面差异具有显著的统计学意义（P0.001）。 2、Real-time PCR检测结果显示：初诊儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6基因的上调有关，与SERPINE1基因的下调有关；复发组中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游TGFβ1、LTBP1基因的上调有关，与IGFBP3、 SERPINE1基因的下调有关。 结论： 1、体外半固体集落培养表明儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群具有多向分化能力，结合我们前期体外悬浮培养结果提示其具有长期增殖能力，说明此亚群具备了LSC的特性，由此CD133-2+CD19-亚群可能是儿童B-ALL来源的LSC免疫表型标志。 2、DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6、SERPINE1以及TGFβ1、LTBP1、IGFBP3、SERPINE1等TGFβ信号通路的转录分子分别参与了初诊和复发B-ALL患儿CD133-2+CD19-亚群细胞生物学特性的调控，这些分子的异常表达可能与儿童B-ALL的发病或复发有关。
【关键词】：儿童B系急性淋巴细胞白血病 CD133-2 白血病干细胞 TGF-β信号通路分子
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言及基金资助9-11
• 第一部分 儿童 B 系急性淋巴细胞性白血病 CD133-2 的生物学特性11-34
• 一、材料和方法11-19
• 二、结果19-26
• 三、讨论26-30
• 四、结论30
• 参考文献30-34
• 第二部分 儿童 B-ALL 中 TGFΒ信号通路分子对 CD133-2~+CD19~-亚群细胞的调控机制初步研究34-51
• 一、材料与方法34-39
• 二、结果39-43
• 三、讨论43-47
• 四、结论47
• 参考文献47-51
• 全文结论51-52
• 综述52-64
• 参考文献61-64
• 中英文对照缩略词表64-66
• 攻读学位期间公开发表的论文66-67
• 致谢67-68

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本文编号：609529