高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用

发布时间：2017-08-02 15:14

  本文关键词：高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用

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【摘要】：目的： 1．建立新生大鼠高氧肺损伤的动物模型； 2．观察与比较高氧性损伤时新生大鼠肺组织的病理组织学改变，以及肺表面活性物质相关蛋白-A（pulmonary surfactant protein-A，SP-A）的mRNA及其蛋白的表达变化，从而探讨SP-A在新生大鼠高氧肺损伤发生、发展中可能的作用； 3．探讨吸入性糖皮质激素布地奈德（budesonide，BUD）是否通过调控SP-A的表达从而发挥对高氧肺损伤的保护作用，为临床防治高氧肺损伤提供理论依据。 方法： 取108只出生1天内的新生Sprague Dawley（SD）大鼠（雌雄不限）随机分成三组：即Ⅰ组：空气组（对照组），Ⅱ组：高氧＋生理盐水组（高氧组），Ⅲ组：高氧＋布地奈德组（干预组），每组36只。 Ⅰ组置于空气中；将Ⅱ、Ⅲ组实验动物持续暴露于90％～95％氧箱中，直至实验结束。Ⅱ组于每日雾化吸入NS10ml，Ⅲ组每日同一时间点吸入溶解BUD的等量的NS(含BUD2mg)。 设立实验后3、7和14天3个时间观测点，处死动物，行支气管肺泡灌洗，测定灌洗液中蛋白含量；取肺组织，计算肺湿/干重比；HE染色观察组织病理学变化；Westen Blot方法检测SP-A蛋白含量、RT-PCR方法检测SP-A mRNA表达水平。 结果： 1．各组实验动物一般情况：Ⅰ组（空气组）中的实验动物在实验期间精神状态佳、活动灵活，进食正常。Ⅱ组（高氧组）中的实验动物逐渐出现症状，表现皮毛无光泽、精神萎靡、活动少,脱氧后烦躁不安,呼吸困难明显,鼻尖发绀,恢复供氧可逐渐缓解；Ⅲ组（干预组）中的实验动物情况介于前两者之间。 2．肺组织病理切片：Ⅰ组（空气组）实验动物肺组织病理切片见肺组织结构规整，无炎症反应，肺泡大小、形态均一；Ⅱ组（高氧组）高氧暴露3d后可见肺血管扩张充血，肺泡腔内出现红细胞及炎性细胞，肺间隔断裂，肺泡腔扩大；高氧7天时，炎性渗出、肺水肿、肺出血较前更加明显，部分肺间隔增宽变形，肺组织结构紊乱；14天时更为明显，肺组织结构紊乱，肺间隔重度增厚，出现明显纤维化改变，肺泡发育受阻，肺泡数量明显减少、大小不一，肺泡腔明显增大,部分肺泡融合，可见肺大泡或肺不张。Ⅲ组（干预组）肺组织形态与结构改变较II组有明显减轻。 3.肺组织湿/干重比值（W/D）：实验3天、7天时，Ⅱ组（高氧组）实验动物肺组织湿/干重比值（W/D）较Ⅰ组（空气组）增高（P0.01），实验14天时，，Ⅱ组较Ⅰ组升高更明显（P0.01），而Ⅲ组（干预组）与Ⅱ组相比，3天、7天、14天的比值均有明显下降（P0.01）。 4.支气管肺泡灌洗液（BLAF）中蛋白含量（TP）测定：实验3天、7天和14天时Ⅱ组（高氧组）BLAF中TP均高于Ⅰ组（空气组），差异有显著性意义（P0.01）；Ⅲ组3天时BLAF中TP较II组降低（P0.05），7天、14天时明显降低（P0.01）。 5.肺组织中SP-A蛋白表达水平的变化：Westen Blot检查测定结果表明：与I组动物比较，II组（高氧组）实验3天时SP-A蛋白表达明显增高（P0.01）；7天、14天SP-A蛋白表达下降，14天时下降更明显（P0.01）。Ⅲ组（干预组）实验3天时SP-A蛋白表达介于I组与II组之间（P0.05），7天、14天SP-A蛋白的表达均较高氧组组显著升高(P0.05)。 6.肺组织中SP-A mRNA表达水平的变化：RT-PCR检查测定结果表明：与I组动物比较，II组实验3天时SP-A mRNA表达水平明显增高，差异有显著性意义(P0.05)；7天时可见表达下降，14天时下降更明显(P0.01)。III组的SP-A mRNA表达水平接近于I组SP-A mRNA的表达趋势；实验3天时SP-A mRNA表达水平介于I组与II组之间，与II组比较有显著性意义(P0.05)；7天、14天时表达水平较II组显著升高(P0.05)。 结论： 1.高氧对新生大鼠肺组织有损伤作用，并随吸氧时间的延长而加重。主要病理变化为肺组织局部水肿和出血、炎症渗出、结构组织紊乱、肺泡发育障碍、肺泡数目减少和肺间质纤维化。 2.高氧性肺损伤时，SP-A的mRNA和蛋白在肺组织中的表达规律呈现先增高后降低的趋势，随着高氧暴露时间的延长与肺损伤程度相平行，提示高氧肺损伤发生过程中机体具有一定的自我保护机制，而肺表面活性物质相关蛋白分泌减少或功能缺陷，是高氧肺损伤的重要因素。 3.吸入糖皮质激素布地奈德可能通过抗氧化、减轻炎症反应，进而上调SP-A的mRNA和蛋白的表达与活化，从而减轻肺损伤，对高氧肺损伤的发生具有一定保护作用。
【关键词】：肺表面活性物质相关蛋白-A 高氧肺损伤 新生鼠 布地奈德
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.19
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-23
• 结果23-28
• 讨论28-34
• 结论34-35
• 参考文献35-40
• 附录40-45
• 综述45-56
• 参考文献52-56
• 英文缩略词表56-57
• 攻读硕士学位期间发表的论文57-58
• 致谢58-59

【参考文献】

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本文编号：609902