过表达ICAM-1间充质干细胞对实验性自身免疫性甲状腺炎作用的机制研究

发布时间：2017-08-02 15:33

  本文关键词：过表达ICAM-1间充质干细胞对实验性自身免疫性甲状腺炎作用的机制研究

  更多相关文章： 细胞间粘附分子-1 间充质干细胞 实验性自身免疫性甲状腺炎 归巢MAPK 信号通路 western blot

【摘要】：目的:1.建立实验性自身免疫性甲状腺炎(Experimental autoimmune thyroiditis,EAT)模型,给予不同MSC治疗,通过检测各种指标,观察各组MSC对EAT的疗效。2.用氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)染色各组MSC,观察输注的MSC在体内的分布。3.提取各组脾细胞蛋白,western blot检测各组ERK及P38通路改变,探讨MSC发挥作用的机制。方法:1.订购6周龄雌性C57BL/6小鼠60只,于动物中心喂养1周后,建立自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型。共分为6组,每组10只,除正常组外,其他各组均于第0天和第14天用猪甲状腺免疫球蛋白(Porcine Thyroglobulin,PTg)分别与完全弗氏佐剂(Freund’s adjuvant complete,CFA)及非完全弗式佐剂(Freund’s adjuvant incomplete,IFA)等体积充分混匀乳化后,皮下多点免疫小鼠,建立EAT模型;治疗组于第0天和第14天给予3×105MSC/只相应细胞治疗,正常组及模型组尾静脉注射等量生理盐水作为对照,第28天称取各组小鼠体重,摘眼球取血,测血清TT3、TT4、TSH、TGAb、TPOAb、TMAb水平,并分离甲状腺组织,行HE染色,观察各组甲状腺破坏严重程度,取各组小鼠脾脏,并称重,计算脾脏指数(脾脏重量mg/体重g),碾碎脾脏,裂解红细胞、洗涤,得到单个核细胞,加入TRIzol试剂,提取RNA,逆转录成为c DNA后进行q-PCR检测炎性因子IL-4、IL-10、IL-17、INF-γ的表达水平;另外,取模型小鼠的脾细胞,体外与各组MSC共培养,检测上述炎性因子的表达水平。2.订购6周龄雌性C57BL/6小鼠60只,运用猪甲状腺球蛋白及弗式佐剂建立模型后,于第0天及第14天给予相应治疗,治疗前用CM-Dil染色各组MSC细胞,尾静脉注射3×105个MSC/只相应细胞,第28天收集标本,麻醉小鼠,心脏灌流,取甲状腺及肺脏组织,制作冰冻切片,荧光显微镜下观察各组MSC在甲状腺及肺脏的分布。3.取上述的各组小鼠脾脏单个核细胞5×106,加入细胞裂解液80ul,提取胞浆蛋白,BCA法测蛋白浓度,western blot检测各组MAPK信号通路中的P38及ERK通路有无改变。结果:1.血清甲状腺相关激素及抗体检测结果显示,模型组TPOAb、TGAb、TMAb、TSH均较正常组高,治疗组较模型组均有所下降,但C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组较C3H10T1/2-MIGR1/MSC组下降明显,差异均有统计学意义(P0.05),模型组TT4的水平较正常组低,治疗组均较模型组有所上升,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组较C3H10T1/2-MIGR1/MSC组上升明显,差异有统计学意义(P0.05)。甲状腺HE染色结果显示模型组甲状腺滤泡破坏,大小不均,上皮细胞增生,炎性细胞浸润,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组及原代MSC组甲状腺破坏明显减轻,上皮增生减少,炎性浸润减少,其他治疗组炎性浸润的改善不明显。模型组脾脏指数明显高于正常组(P0.01),C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组较C3H10T1/2-MIGR1/MSC组脾脏指数下降,(P0.01),而其他治疗组脾脏指数改善不明显。体内、体外实验q-PCR检测炎症因子,模型组IL-10及IL-4水平均较正常组低,IL-17及INF-γ均较正常高,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组较C3H10T1/2-MIGR1/MSC组IL-10及IL-4的水平明显增加,IL-17及INF-γ的分泌明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。2.MSC归巢研究显示C3H10T1/2-ICAM-1/MSC归巢到甲状腺最明显,而原代MSC在肺部滞留最多。3.western blot显示模型组ERK及P38较正常组磷酸化增强,而C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组ERK及P38去磷酸化最明显。结论:1.给予C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治疗组,无论从病理、血清抗体指标、炎性因子的改善、脾脏指数下降情况均说明C3H10T1/2-ICAM-1/MSC组疗效最佳。2.MSC归巢实验结果显示,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治疗组归巢到甲状腺最多。故ICAM-1促进MSC的体内迁移能力。3.C3H10T1/2-ICAM-1/MSC通过使小鼠免疫细胞内P38、ERK的去磷酸化,调节免疫细胞内的相关基因的表达,从而影响免疫细胞的分化、增殖、迁移等。
【关键词】：细胞间粘附分子-1 间充质干细胞 实验性自身免疫性甲状腺炎 归巢MAPK 信号通路 western blot
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.8
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、建立EAT小鼠模型，给予各组MSC治疗，并观察疗效16-36
• 1.1 对象和方法16-24
• 1.1.1 主要试剂和仪器16-17
• 1.1.2 实验动物17
• 1.1.3 实验所用细胞17
• 1.1.4 相关引物序列17-18
• 1.1.5 方法18-23
• 1.1.6 统计分析23-24
• 1.2 结果24-33
• 1.2.1 血清中TT3、TT4、TSH、TPOAb、TMAb、TGAb水平24-29
• 1.2.2 甲状腺组织病理比较29-30
• 1.2.3 q-PCR检测炎性因子水平30-31
• 1.2.4 脾脏指数31-32
• 1.2.5 体外共培养，，q-PCR检测炎性因子32-33
• 1.3 讨论33-35
• 1.4 小结35-36
• 二、ICAM-1 分子促进MSC归巢36-41
• 2.1 对象和方法36-37
• 2.1.1 主要试剂及仪器36
• 2.1.2 实验动物36
• 2.1.3 实验所用细胞36-37
• 2.1.4 方法37
• 2.2 结果37-39
• 2.3 讨论39-40
• 2.4 小结40-41
• 三、ICAM-1 通过抑制MAPK通路发挥治疗作用41-47
• 3.1 对象和方法41-44
• 3.1.1 实验主要试剂及仪器41-42
• 3.1.2 主要试剂的配制42
• 3.1.3 方法42-44
• 3.1.4 统计学处理44
• 3.2 结果44-45
• 3.3 讨论45-46
• 3.4 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-51
• 发表论文和参加科研情况说明51-52
• 综述 MSC与多种疾病的关系及其临床应用前景52-60
• 综述参考文献55-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘强,彭莉,杜艺,李宓,贾宁,邹和群;新型人工肝单纯白蛋白透析治疗肝衰竭的临床研究[J];中国危重病急救医学;2005年10期

2 苏芳;肖卫国;杨娉婷;;自身免疫性甲状腺病伴SLE 2例分析[J];中国误诊学杂志;2010年16期

本文编号：609996