静脉注入胆红素对新生大鼠脾IRAK-4及p-JNK蛋白表达的影响

发布时间：2017-08-16 12:39

  本文关键词：静脉注入胆红素对新生大鼠脾IRAK-4及p-JNK蛋白表达的影响

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【摘要】：目的：建立新生大鼠高胆红素血症模型,探讨静脉注入胆红素对脾白细胞介素1受体相关激酶-4(interleukin-1receptor associated kinase-4, IRAK-4)及磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase, p-JNK)蛋白表达的影响。方法：1.实验分组：将144只7～8d新生SD大鼠,随机分为空白对照组(Ⅰ)、脂多糖对照组(Ⅱ)、15mg/kg旦红素对照组(Ⅲ)、15mg/kg胆红素+脂多糖组(Ⅳa)、30mg/kg胆红素+脂多糖组(Ⅳb)和50mg/kg胆红素+脂多糖组(Ⅳc),共6组,每组24只,各组又分为2h、5h、24h3个时间点,每个时间点8只。2.建立新生大鼠高胆红素血症模型：(1)乙醚麻醉新生SD大鼠,分别经颈静脉注入不同剂量胆红素(15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg)；空白对照组和脂多糖对照组给予生理盐水0.1m1颈静脉注入。(2)在颈静脉注入1h后,空白对照组和15mg/kg胆红素对照组腹腔注入0.05ml生理盐水；其余各组腹腔注入1mg/kg脂多糖。(3)分别于颈静脉注入后2h、5h、24h采血,测血浆胆红素浓度。(4)采血后取脾脏,制成石蜡切片,采用免疫组织化学方法检测脾IRAK-4和p-JNK蛋白的表达。结果：1.新生SD大鼠在注入胆红素后不同时间,皮肤出现不同程度的黄染,30～40分钟黄染达高峰,1h后皮肤黄染逐渐消退。在胆红素注入1h时,15mg/kg、30mg/kg和5Omg/kg胆红素组血浆总胆红素浓度95%的置信区间分别为：(106.31,123.49(196.58,238.90) μmol/L和(325.15,349.07)μmol/L,胆红素注入剂量与血浆总胆红素浓度呈正相关(rs=0.9452,P0.01)。以上3个血浆总胆红素浓度范围分别定为本模型的低、中、高胆红素浓度范围。2.脂多糖单独作用可促进脾IRAK-4和p-JNK的表达(P0.01),在脂多糖注入后1h时即可观察到这种促进作用,4h时作用最强,24h时对IRAK-4的促进作用明显减弱,对p-JNK的促进作用消失。3.低浓度胆红素单独作用可抑制脾IRAK-4和p-JNK的表达(P0.01)。对IRAK-4的抑制作用,在胆红素注入后2h时即可观察到,5h时作用最强,24h时作用消失；对p-JNK的抑制作用,在胆红素注入后2h时已较强,以后逐渐减弱,24h时仍存在。4.低、中、高浓度胆红素对脂多糖刺激脾IRAK-4表达有抑制作用(P0.01),胆红素注入后2h时即可观察到这种抑制作用,5h时作用明显,24h时低、中浓度胆红素的抑制作用消失,高浓度胆红素的抑制作用仍然存在(P0.01)。5.中、高浓度胆红素对脂多糖刺激p-JNK表达有促进作用(P0.01),胆红素注入后2h时即可观察到这种促进作用,5h时作用最强,24h时作用减弱；低浓度胆红素对脂多糖刺激p-JNK表达有抑制作用(P0.01),胆红素注入后2h时即可观察到这种抑制作用,以后逐渐减弱,5h时抑制作用消失。6.在脂多糖刺激下,IRAK-4和p-JNK的表达与胆红素血浆浓度的相关分析结果：(1)2h、5h和24h的IRAK-4IOD(SUM)值与胆红素浓度呈负相关(r分别为：—0.838、—0.845和—0.580,P0.01)。(2)2h、5h和24h的p-JNK IOD (SJM)值与胆红素浓度呈正相关(r分别为0.897、0.935,P0.01和0.466,P0.05)。7.在胆红素与脂多糖作用下,IRAK-4和p-JNK间的相关分析结果：(1)2h、5h时IRAK-4与p-JNK IOD (SUM)值呈负相关(r分别为—0.846和—0.946,P0.01)。(2)24h时IRAK-4与p-JNK IOD (SUM)值无相关(r为—0.384,P=0.064)。结论：1.LPS单独作用能够促进IRAK-4和p-JNK的表达。2.低浓度胆红素单独作用能够抑制IRAK-4和p-JNK的表达。3.低、中、高浓度胆红素对LPS刺激IRAK-4表达有抑制作用,这种抑制作用呈浓度依赖性,随着胆红素浓度的升高,抑制作用增强,持续时间延长。4.中、高浓度胆红素可促进LPS刺激JNK磷酸化,随着胆红素浓度的升高,促进作用增强,持续时间延长；低浓度胆红素可抑制LPS刺激JNK磷酸化。提示胆红素影响免疫细胞的机制可能与调节TLR4信号通路中IRAK-4的表达和JNK的磷酸化有关。
【关键词】：胆红素 高胆红素血症 IRAK-4 p-JNK 脾脏 婴儿 新生
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.17
【目录】：

• 英汉缩略词对照表3-4
• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-20
• 1 实验动物13
• 2 主要实验仪器13
• 3 主要实验试剂和材料13-14
• 4 主要溶液的配制14
• 5 实验预期目标14-15
• 6 实验分组及流程15-16
• 7 实验方法16-19
• 8 统计学处理19-20
• 结果20-37
• 讨论37-42
• 结论42-43
• 参考文献43-48
• 致谢48-49
• 综述49-66
• 参考文献59-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 覃萍;曾华;;新生儿高胆红素血症对肾小管功能损害与尿β_2微球蛋白的关系[J];中国当代儿科杂志;2007年02期

2 刘会领;陈昌辉;陈敏;吴青;李茂军;;胆红素对新生儿脐血单核细胞表面分子Toll样受体4的影响[J];中国当代儿科杂志;2011年02期

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本文编号：683350