高游离脂肪酸环境下GLP-1对内皮细胞NO生成的影响及机制

发布时间：2017-08-17 21:38

  本文关键词：高游离脂肪酸环境下GLP-1对内皮细胞NO生成的影响及机制

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【摘要】：目的：研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide1, GLP-1)能否缓解棕榈酸(PA)导致的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVECs) NO生成受损,并初步探讨其作用机制。 方法：用不同浓度的PA (0,100μM,200μM,400μM)孵育HUVECs,硝酸酶还原法检测培养液NO浓度,Western Blot检测eNOS(Ser1177)的磷酸化水平,探讨可能引起HUVECs的NO生成明显受损的PA浓度。用不同浓度的GLP-1(0,1ng/ml,5ng/ml,10ng/ml)孵育HUVECs,检测培养液NO浓度,Western Blot检测eNOS(Ser1177)的磷酸化水平,摸索GLP-1的最佳有效浓度。用GLP-1干预PA孵育过的HUVECs,研究GLP-1能否缓解游离脂肪酸导致的HUVECs的NO生成受损,加或不加P13K抑制剂,探讨其可能的作用机制。实验分组如下：①对照组用含1%BSA的培养液；②PA组加入400μM PA;③PA+GLP-1组加入400μM PA+1ng/ml GLP-1;④PA+GLP-1+LY294002组加入400μM PA+lng/ml GLP-l+20μM PI3K抑制剂LY294002。各组取培养液测NO浓度,Western Blot检测Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平。 结果：(1)HUVECs经浓度100μM、200μM、400μM、600μM的PA孵育后,随PA浓度升高,培养液NO浓度降低,eNOS(Ser1177)的磷酸化水平下降,PA浓度在200μM或以上时,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。(2) HUVECs经浓度1ng/ml、5ng/m;、10ng/ml的GLP-1孵育后,培养液NO浓度增高,eNOS(Ser1177)的磷酸化水平升高,在1ng/ml处最明显,与对照度相比差异有统计学意义(P0.05)。(3) HUVECs经对照组、PA组、PA+GLP-1组、PA+GLP-1+LY294002组干预后,PA+GLP-1组的培养液NO浓度、Akt (Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平较PA组均上升(P0.05),但培养液NO浓度、Akt (Ser473)磷酸化水平仍低于对照组,差异有统计学意义(P0.05); PA+GLP-1+LY294002组的培养液NO浓度、Akt (Ser473)磷酸化水平低于PA+GLP-1组,但培养液NO浓度、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平仍高于PA组,差异有统计学意义(P0.05)。 结论：1、高游离脂肪酸可抑制eNOS的活性,减少血管内皮细胞NO的产生。2、正常情况下,GLP-1可上调eNOS活性,促进NO产生。3、GLP-1可部分逆转高FFAs造成的内皮损伤,PI3K-Akt-eNOS通路的上调可能参与这一过程。
【关键词】：GLP-1 游离脂肪酸 HUVECs NO 机制
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R723.14
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 目录9-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 第一章 前言11-14
• 第二章 材料和方法14-24
• 2.1 材料14-17
• 2.2 实验方法17-24
• 第三章 实验结果24-33
• 3.1 不同浓度PA对HUVECs的eNOS/NO的影响24-26
• 3.2 不同浓度GLP-1对HUVECs的eNOS/NO的影响26-29
• 3.3 高FFAs(PA 400μM)条件下GLP-1(1ng/ml)对HUVECs的eNOS/N #0的影响及其可能的信号通路29-33
• 第四章 讨论33-38
• 第五章 结论38-39
• 第六章 下一步研究方向39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-57
• 参考文献52-57
• 致谢57

【参考文献】

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本文编号：691271