婴幼儿关节软骨细胞的体外培养和表型研究及逆向诱导分化初探

发布时间：2017-08-21 17:35

  本文关键词：婴幼儿关节软骨细胞的体外培养和表型研究及逆向诱导分化初探

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【摘要】：一、婴幼儿关节软骨细胞体外培养及其鉴定 目的探索体外培养婴幼儿关节软骨细胞的方法，并对其细胞表型进行鉴定，为下一步逆向诱导分化提供细胞。 方法取多指患儿指间关节的软骨，经过机械剪切、胰酶、胶原酶的消化获得细胞后，用1640培养基进行体外培养。 倒置显微镜观察细胞形态、生长情况，绘制关节软骨细胞生长曲线；透射电子显微镜观察细胞超微结构； Alcian blue染色、蕃红花“O”-亮绿染色检验细胞产生的蛋白聚糖；阿利新兰法检测不同代次细胞蛋白聚糖含量；免疫组织化学染色检测细胞分泌的II型胶原。 结果婴幼儿关节软骨细胞贴壁生长。原代细胞生长缓慢，细胞10~15天长满六孔培养板的一孔，进行传代；第1代、2代、3代等细胞生长旺盛，3~5天长满40ml培养瓶的一瓶；细胞在第12代、13代出现凋亡表现。 关节软骨细胞的生长曲线呈倒“S”型，透射电子显微镜观察到细胞具有软骨细胞共性。Alcian blue染色阳性，蕃红花“O”-亮绿染色阳性；第1、2、3代关节软骨细胞蛋白聚糖含量逐渐增高，第5、6代后细胞蛋白聚糖含量逐渐减低；免疫组织化学染色证实细胞分泌II型胶原。 结论在体外成功建立了婴幼儿关节软骨细胞的培养方法，经多种鉴定证实所培养出的细胞是关节软骨细胞。 二、婴幼儿关节软骨细胞采用iPS技术逆向诱导分化的初步研究 目的尝试采用iPS技术诱导婴幼儿关节软骨细胞逆向分化为多能分化状态。 方法先培养胎鼠肌细胞并用丝裂霉素处理后做滋养层细胞，将体外培养的第1代、第2代人关节软骨细胞分别用含4种转录因子的逆转录病毒进行感染，再转至滋养层细胞进行培养。 结果第1代或第2代关节软骨细胞经逆向诱导培养一月后，由原来的梭形转变为多边形，呈克隆样生长，但是此后细胞未见生长，逐渐死亡，此实验未进行下去，现在相关研究人员还在不断摸索中。 结论采用iPS技术诱导人关节软骨细胞存在一定的技术障碍。
【关键词】：人关节软骨细胞 体外培养 鉴定 iPS 逆向诱导
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R726.8
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分：小儿关节软骨细胞体外分离培养及鉴定11-19
• 材料与方法11-14
• 结果14-16
• 讨论16-19
• 第二部分：小儿关节软骨细胞采用 IPS 技术逆向诱导的初步研究19-23
• 材料与方法19-20
• 结果20
• 讨论20-23
• 参考文献23-31
• 附图31-38
• 综述38-48
• 参考文献42-48
• 中英文双解缩略词表48-49
• 攻读硕士期间公开发表的论文49-50
• 致谢50-52

【参考文献】

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本文编号：714232