重症手足口病患儿肠道病毒71型的检测及基因特征分析

发布时间：2017-08-30 10:06

  本文关键词：重症手足口病患儿肠道病毒71型的检测及基因特征分析

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【摘要】：目的 对2012年手足口病流行期间天津市儿童医院收治入院的重症手足口病(HFMD)患儿进行病原学分析,了解重症病例肠道病毒71型(EV71)的检出和其他病原体的流行趋势变化,探讨不同临床标本及IgM抗体检测对于EV71感染的早期诊断价值,同时通过VP1全基因扩增了解EV71流行株的的型别和基因特征,为天津市EV71病毒毒株的基因库及其分子流行病学研究补充资料,为本地区重症手足口病的监测、治疗和预后提供参考。 方法 以2012年7月至9月天津市儿童医院收治入院的98例重症手足口病患儿为研究对象,收集临床标本共188份,包括咽拭子79份,粪便86份,脑脊液23份,其中67例患儿同时留取咽拭子和粪便标本。整理患儿临床资料,提取病毒核酸,采用三通道一步法实时荧光RT-PCR检测总肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16(CA16),同时采用ELISA法检测患者血清中的EV71特异性IgM抗体。然后从EV71阳性标本中选取部分病例进行EV71的VP1全基因扩增,并进行核苷酸序列比对和遗传进化分析。 结果 98例重症HFMD患儿中EV71的阳性率为60.2%(59/98)；CA16的阳性率为10.2%(10/98)；非EV71非CA16的其他类型肠道病毒(NENC)占16.3%(16/98)；EV总阳性率为82.7%(81/98),同时有4例患儿为EV71和CA16双阳性。本组重症病例中男女性患儿的比例大约为2：1,二者的肠道病毒检出率无显著统计学差异。5岁以下的患儿占95.9%,75.5%在6个月到2岁之间,不同年龄组患儿的肠道病毒检出率差异无统计学意义。粪便标本的肠道病毒阳性率显著高于咽拭子标本,分别为82.6%和53.2%。23份脑脊液标本中均未检测到肠道病毒核酸。ELISA法检测的血清EV71IgM抗体阳性率为70.4%,高于荧光RT-PCR检测的病毒核酸阳性率(60.2%)。16株EV71VPl全基因序列的遗传进化分析表明本研究中的EV71毒株属于C4a亚型。 结论 1、2012年天津市重症手足口病的病原体以EV71为主,其次是EV71和CA16以外的其他肠道病毒。 2、重症手足口病的易感人群为5岁以下的儿童,尤其是2岁以下患儿,应警惕幼龄儿童发展为重症的可能,但是肠道病毒检出率无明显性别和年龄差异。 3、粪便标本的病毒检出率高于咽拭子,检测结果更稳定,更适合做病原学检测以辅助疾病的早期诊断,脑脊液中不易检测到病毒。 4、ELISA法IgM抗体检测操作简单、快速经济,能够满足基层医疗机构EV71感染的防控需求。 5、2012年度天津市导致重症手足口病的EV71优势毒株为C4a基因亚型。
【关键词】：手足口病 肠道病毒71型 荧光RT-PCR IgM抗体 基因型 儿童
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、肠道病毒的鉴定与分型14-25
• 1.1 对象和方法14-18
• 1.1.1 研究对象14-15
• 1.1.2 主要仪器和试剂15
• 1.1.3 方法和步骤15-18
• 1.1.4 统计学分析18
• 1.2 结果18-21
• 1.2.1 肠道病毒荧光RT-PCR检测结果18-19
• 1.2.2 不同性别、年龄儿童肠道病毒检出率的比较19-20
• 1.2.3 不同标本肠道病毒的检出情况20-21
• 1.2.4 肠道病毒71型的IgM抗体检测结果21
• 1.2.5 临床资料分析21
• 1.3 讨论21-24
• 1.3.1 重症手足口病的病原学特征21-22
• 1.3.2 重症手足口病的易感人群分析22-23
• 1.3.3 不同临床标本对于疾病早期诊断的价值23-24
• 1.3.4 肠道病毒快速检测方法的评价24
• 1.4 小结24-25
• 二、肠道病毒71型的VP1基因特征分析25-32
• 2.1 对象和方法25-27
• 2.1.1 研究对象25
• 2.1.2 主要仪器和试剂25-26
• 2.1.3 方法和步骤26-27
• 2.2 结果27-29
• 2.2.1 肠道病毒71型VP1基因扩增27
• 2.2.2 序列同源性比对分析27-28
• 2.2.3 系统进化分析28-29
• 2.3 讨论29-31
• 2.4 小结31-32
• 结论32-33
• 参考文献33-39
• 发表论文和参加科研情况说明39-40
• 附录40-43
• 综述43-69
• 综述参考文献56-69
• 致谢69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：758652