二步化学衍生法在苯丙酮尿症GC-MS应用中的初步探讨

发布时间：2017-09-26 13:36

  本文关键词：二步化学衍生法在苯丙酮尿症GC-MS应用中的初步探讨

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【摘要】：目的:1.通过二步化学衍生法结合气相色谱-质谱联用(Gas Chromatography-mass Spectrometry,GC-MS)技术分析苯丙酮尿症(Phenylketonuria,PKU)患儿及正常儿童尿液,探讨二步化学衍生法在PKU尿液检测中生物标志物种类,并与文献相比较。2.二步化学衍生法方法学考察。3.初步建立13种差异明显生物标志物的正常参考值范围方法:1.采集60例正常儿童尿液(对照组)和20例苯丙酮尿症患儿治疗前的尿液(PKU组),经二步化学衍生法处理后,进行GC-MS差异分析,对浓度差异明显物质进行定性分析,并与文献相比较。2.以苯丙酮酸为例,采用肌酐为内标,进行精密度和准确度的方法学验证。3.采集120例正常儿童尿液,对浓度差异明显物质进行分析,得出生物标志物的正常值参考范围。结果:1.二步化学衍生法处理PKU组尿液后,经GC-MS分析,可同步检测到苯乙酰谷胺酰胺、苯乙酸、扁桃酸、苯丙氨酸、2-羟基苯乙酸、苯乳酸、4-羟基苯乙酸、苯丙酮酸、N-乙酰苯丙氨酸、香草扁桃酸、4-羟基苯乳酸、4-羟基苯丙酮酸、5-羟基吲哚-3-丙酸、5-羟基吲哚-3-乙酸14种生物标志物,其保留时间(Retention Time,RT)相对恒定。2.两组间苯乙酰谷胺酰胺、苯乙酸、扁桃酸、苯丙氨酸、2-羟基苯乙酸、苯乳酸、4-羟基苯乙酸、苯丙酮酸、N-乙酰苯丙氨酸、香草扁桃酸、4-羟基苯乳酸、4-羟基苯丙酮酸、5-羟基吲哚-3-丙酸、5-羟基吲哚-3-乙酸均有显著性差异,可作为PKU的检测指标,与文献报道相一致;两组间4-羟基苯乙酸无显著性差异;3.苯丙酮酸标准曲线为:y=0.1042x-0.0147,线性相关系数r2=0.996,线性关系良好;三种不同浓度标准溶液测定的日内及日间RSD均5%;苯丙酮酸回收率均85%,精密度及准确度好;4.由120例正常儿童尿液可得出生物标志物的参考值范围(生物标志物/肌酐):苯乙酰谷胺酰胺0、苯乙酸0、扁桃酸0~0.5387、2-羟基苯乙酸0~0.1740、苯乳酸0、苯丙酮酸0、N-乙酰苯丙氨酸0、香草扁桃酸0~1.1336、4-羟基苯乳酸0~0.8574、4-羟基苯丙酮酸0~0.0703、5-羟基吲哚-3-丙酸0、5-羟基吲哚-3-乙酸0~0.8415;结论:1.二步化学衍生法可检测到PKU患儿尿液中14种代谢物质,除4-羟基苯乙酸外,其余13种代谢标志物在PKU组和对照组中有显著性差异,可作为临床检测PKU的生物标志物指标,与文献报道相一致;2.该方法对混合样品分离好,保留时间稳定,日间及日内差异小,精密度及准确度好,回收率高。符合生物样本分析方法基本要求。该检测无创性,标本采集和保存简便,适于PKU的筛查和后期监测,可在临床推广;3.确定了二步化学衍生法联合GC-MS检测13种生物标志物的正常值范围;
【关键词】：二步化学衍生法 苯丙酮尿症 气相色谱-质谱联用 生物标志物
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.8;O657.63
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要英文缩略词索引11-12
• 第1章 绪论12-18
• 1.1 苯丙酮尿症的概述12
• 1.2 苯丙酮尿症的生化机制12-13
• 1.3 苯丙酮尿症的生化诊断13-14
• 1.4 GCMS在苯丙酮尿症中的应用14-18
• 第2章 二步化学衍生法在苯丙酮尿症中GC-MS的生物标志物分析18-25
• 2.1 实验材料与试剂18-19
• 2.2 实验方法19-20
• 2.3 实验结果20-24
• 2.4 分析与讨论24-25
• 第3章 二步化学衍生法方法学考察25-30
• 3.1 实验材料与试剂25-26
• 3.2 实验方法26-27
• 3.3 实验结果27-29
• 3.4 分析与讨论29-30
• 第4章 建立尿液中13种生物标志物正常值参考范围30-34
• 4.1 实验材料与试剂30
• 4.2 实验方法30-32
• 4.3 实验结果32-33
• 4.4 分析与讨论33-34
• 第5章 结论34-35
• 参考文献35-41
• 文献综述41-48
• 参考文献45-48
• 致谢48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 鄢慧明;唐华;胡浩;谢琼;王华;;2001～2011年湖南省新生儿苯丙酮尿症(PKU)筛查结果分析及体会[J];中国优生与遗传杂志;2013年04期

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本文编号：923828