常山酮抑制放疗导致Lewis肺癌细胞小鼠移植瘤上皮间质转化的机制研究

发布时间：2017-10-23 23:15

  本文关键词：常山酮抑制放疗导致Lewis肺癌细胞小鼠移植瘤上皮间质转化的机制研究

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【摘要】：目的:探讨应用常山酮阻断转化生长因子-β(TGF-β)信号传导通路,并观察其与肿瘤的上皮间质转化(EMT)的相关性。方法:建立肿瘤移植瘤动物模型,挑选80只肿瘤负荷相近的小鼠随机分为五组,分别为空白对照组(NC)、常山酮组、放射治疗组(RT)、常山酮联合放射治疗组,以及放射治疗联合TGF-β抑制剂组,每组16只。当移植瘤最大径长至0.8cm时,作为实验的第1天。对照组不做处理;常山酮组予常山酮灌胃给药,每只鼠30μg/0.2ml/d,连续一个月或至处死;放射治疗组于第3天、4天给予移植瘤6MV-X线照射,放射治疗剂量为10Gy×2;放射治疗联合常山酮组给药处理同常山酮组,放射治疗的时间及剂量同放射治疗组;放射治疗联合抑制剂组于第1天开始予TGF-β抑制剂(SB431542终浓度1μM)灌胃给药,每只小鼠0.1ml/d,连续一个月或至处死,放射治疗处理同放射治疗组。分别应用ELISA、Western Blot、免疫组化及免疫荧光等技术,研究各组Lewis肺癌(LLC)细胞系TGF-β信号传导通路的变化及其对EMT生物指标的影响。结果:ELISA实验结果显示,放射治疗后小鼠移植瘤LLC细胞中TGF-β水平较放射治疗前升高,且放疗后10天、14天时TGF-β所出现的变化和进行治疗之前对比而言,差异具有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学结果显示:单纯放射治疗组肿瘤组织中可见大量黄色染色区域,TGF-β呈阳性表达。单纯放射治疗组TGF-β水平较空白对照组明显升高(P0.05),而放射治疗联合常山酮组TGF-β水平明显低于单纯放射治疗组(P0.05),放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组TGF-β水平无统学差异(P0.05)。通过实验研究确立了照射及常山酮对TGF-β信号通路的影响。实验中发现,在单纯放射治疗组中,小鼠的移植瘤中出现的P-Smad2蛋白表达水平和空白对照组进行比较来看,有很明显的上升,而Smad6、7的蛋白表达情况则出现下降;此外,两联合组小鼠移植瘤内的P-Smad2蛋白表达较单纯照射组明显降低,Smad6、7蛋白表达较空白对照组明显升高。移植瘤Western Blot显示:RT组E-cadherin表达降低、N-cadherin、Vimentin表达升高;两联合组较RT组E-cadherin表达升高,N-cadherin、Vimentin表达降低。小鼠移植瘤免疫组织化学结果显示:单纯照射组较空白对照组E-cadherin表达降低、N-cadherin表达升高;两联合组较单纯照射组E-cadherin表达均升高,N-cadherin表达均呈阴性。放射治疗结束后第12天(实验第15天),两联合组肿瘤体积开始小于放射治疗组(P值均小于0.05)。结论:放射治疗极有可能是启动了TGF-β信号通路,从而导致上皮间质化被诱导出现;常山酮所能起到的作用是能够抑制放疗所导致的肿瘤细胞移植瘤EMT,也就是说,其作用机制可能与TGF-β信号通路的激活或阻断存在联系。
【关键词】：转化生长因子-β SB431542 放射治疗 常山酮 上皮间质转化
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2;R730.55
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 对象与方法13-25
• 1.1 材料和仪器13-15
• 1.1.1 细胞系和动物13
• 1.1.2 试剂13-14
• 1.1.3 耗材14
• 1.1.4 照射装备和参数14
• 1.1.5 仪器设备14-15
• 1.2 实验方法15-25
• 1.2.1 试剂的配制15-16
• 1.2.2 细胞培养16-17
• 1.2.3 动物的饲养管理17
• 1.2.4 移植瘤模型的建立17
• 1.2.5 小鼠分组及治疗方法17-18
• 1.2.6 小鼠肿瘤组织中蛋白含量的测定18
• 1.2.7 Western Blot法测定smad蛋白水平18-19
• 1.2.8 免疫印迹19-22
• 1.2.9 Elisa法检测小鼠肿瘤组织TGF-β 水平22-23
• 1.2.10 非生物素免疫组化二步法检测肿瘤组织EMT相关蛋白及TGF-β表达情况23-24
• 1.2.11 统计学方法24-25
• 结果25-31
• 2.1 TGF-β 水平的测定25-26
• 2.1.1 免疫组织化学结果25
• 2.1.2 不同时间段TGF-β 的表达情况25-26
• 2.1.3 各组TGF-β 水平的变化26
• 2.2 EMT相关标志物变化26-29
• 2.2.1 细胞免疫荧光显示EMT相关标志物变化26-27
• 2.2.2 小鼠移植瘤免疫组化显示27-28
• 2.2.3 移植瘤Western Blot显示28-29
• 2.3 TGF-β/smad通路变化29-30
• 2.4 TGF-β 抑制剂对小鼠肿瘤细胞的抑制作用30-31
• 讨论31-40
• 3.1 上皮间质转化与肿瘤的增殖和转移31-33
• 3.2 EMT与肿瘤放化疗抵抗的关系33-35
• 3.3 放射治疗可以导致上皮间质转化35-36
• 3.4 TGF-β信号通路与EMT36-37
• 3.5 放射治疗会导致TGF-β 的升高37-38
• 3.6 常山酮阻断TGF-β 通路38-40
• 结论40-41
• 论文创新点41-42
• 参考文献42-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述 上皮间质转化网络是肿瘤治疗抵抗的新靶点55-89
• 综述参考文献68-89
• 致谢89-90
• 个人简历90

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本文编号：1085864