载STEAP-1抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及寻靶实验研究

发布时间：2017-11-14 03:15

  本文关键词：载STEAP-1抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及寻靶实验研究

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【摘要】：目的:采用生物素-亲和素法制备载前列腺跨膜上皮抗原-1(Six-transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate,STEAP)抗体的新型靶向超声微泡,检测其结合率、稳定性及体外寻靶能力;通过荷人前列腺癌移植瘤裸鼠超声增强显影来检测载STEAP-1抗体靶向微泡的体内寻靶能力。方法:(1)体外培养人前列腺癌细胞LNCa P和PC3,分别采用免疫荧光法定性检测和Western blot法半定量检测STEAP-1在两种前列腺癌细胞中的表达情况;(2)采用生物素-亲和素法将STEAP-1抗体与普通声诺维微泡牢固结合,显微镜下观察靶向微泡荧光情况,并通过流式检测其结合率与稳定性;(3)将所制备的靶向微泡与细胞爬片充分孵育反应,检测其体外结合能力;(4)建立荷人前列腺癌移植瘤裸鼠模型,分别利用靶向微泡、普通声诺维微泡对裸鼠进行超声增强显影,实时观察移植瘤的造影剂灌注情况、分布特征,并采用Contrast Dynamic定量分析软件对时间-强度曲线(Time-intensity Curve,TIC)进行分析,获取峰值强度(Peak Intensity,PI)、达峰时间(Time to Peak,TTP)、曲线下面积(Area under the Curve,AUC)及平均渡越时间(Mean Transit Time,MTT)。结果:(1)荧光显微镜下观察,视野内两种前列腺癌细胞表面均发出绿色荧光,即呈阳性表达;Western blot实验结果显示,LNCa P细胞中STEAP-1呈相对高水平表达。(2)载STEAP-1抗体靶向微泡涂片后于荧光显微镜下观察,微泡表面见呈现环状绿色荧光,而普通对照组在镜下视野丢失;流式分析检测显示,所制备的靶向微泡大小均一,结合率明显高于同型对照组,差异有统计学意义(p0.05),震荡后结合率略小于震荡前,但差异无统计学意义(p0.05)。(3)靶向微泡与前列腺癌细胞孵育反应后,出现微泡向细胞区域聚集的现象;PBS缓冲液冲洗后,靶向微泡于细胞周边呈花环状粘附,LNCa P细胞的粘附率高于PC3细胞,差异有统计学意义(p0.05);PBS缓冲液再次冲洗,两种细胞的前、后粘附率比较均显示差异无统计学意义(p0.05)。(4)分别经尾静脉注射靶向微泡、普通微泡,均见移植瘤组织回声逐渐增强,达一定程度后逐渐减弱,靶向微泡、普通微泡的PI、AUC、MTT有显著差异(p0.05),前者相对高于后者,而TTP无差异(p0.05)。LNCa P移植瘤与PC3移植瘤相比,PI、AUC有差异(p0.05),前者相对高于后者,而TTP、MTT无差异(p0.05)。结论:(1)STEAP-1蛋白在人前列腺癌细胞LNCa P和PC3中均呈阳性表达,且前列腺癌分化早期代表细胞株LNCa P细胞呈相对高水平表达;(2)载STEAP-1抗体的新型靶向微泡可经生物素-亲和素法成功制备,STEAP-1抗体与普通微泡的结合率高且稳定性较好;(3)载STEAP-1抗体靶向微泡体外寻靶时可与人前列腺癌细胞牢固结合,且LNCa P细胞较PC3细胞结合率高;(4)载STEAP-1抗体靶向微泡在荷人前列腺癌移植瘤裸鼠体内的寻靶特异性较高且靶向性好,说明STEAP-1可作为超声靶向造影的理想靶点之一,具备一定的基础研究和临床应用价值。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25;R445.1

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本文编号：1183607