微泡介导声辐射力增强MSCs归巢修复血管内皮的实验研究

发布时间：2018-11-10 06:45

【摘要】：第一部分靶向微泡-干细胞复合体的制备 目的制备一种新型靶向微泡-干细胞复合体。 方法采用“生物素-亲和素”桥连法构建携抗ICAM-1抗体的靶向微泡（MBICAM-1）。用带正电荷的多聚赖氨酸（PLL）对MBICAM-1进行包覆和修饰，使靶向微泡表面带正电荷。采用静电吸附法将PLL修饰的MBICAM-1与兔骨髓间充质干细胞（MSCs）共同孵育，制备MBICAM-1-MSCs复合体，，流式细胞仪检测靶向微泡与MSCs的结合率。 结果MBICAM-1经PLL修饰后，微泡表面带正电荷，但微泡形态、粒径以及与损伤内皮细胞（HUVEC）的结合率与未经PLL修饰的MBICAM-1无显著性差异（P＞0.05）。PLL修饰的MBICAM-1与MSCs结合形成MBICAM-1-MSCs复合体，且MSCs与MBICAM-1之间的比例为1:40时，二者之间结合率达（29.45±2.88）%。结论成功制备MBICAM-1-MSCs复合体,当MSCs与MBICAM-1之间的比例为1:40时，其结合率最大。 第二部分微泡介导声辐射力增强MSCs归巢修复损伤血管内皮的研究 目的探讨微泡介导声辐射力增强MSCs归巢修复损伤血管内皮的有效性。 方法将42只雌性新西兰大白兔，随机分为对照（C）组6只，实验组36只。实验组建立髂动脉球囊损伤模型，术后随机分为：手术（O）组、手术+超声辐照（O+US）组、手术+微泡+超声辐照（O+MB+US）组、手术+MSCs（O+M）组、手术+复合体（O+TM）组、手术+复合体+超声辐照（O+TM+US）组。在髂动脉球囊损伤模型建立后即刻，将雄性MSCs或靶向微泡-干细胞复合体移植至损伤动脉内孵育30min，超声辐照组使用功率0.66w,占空比100%频率为1MHZ的脉冲超声经体外辐照损伤的髂动脉5min。Real-Time PCR检测血管组织SRY mRNA的表达。另取42只雌性兔做相同的分组处理，用雄性MSCs或靶向微泡-干细胞复合体连续治疗7d，移植后7d、14d、21d、28d取血管组织Real-Time PCR检测eNOS mRNA的表达。移植后28d取血管组织进行相关指标测定，HE染色检测血管形态学改变，免疫组织化学检测PCNA、CD31、vWF的表达。 结果细胞移植后即刻，在（O+M）组、（O+TM）组、（O+TM+US）组均可检测到SRY mRNA的表达，其余各组几乎无表达（P0.05）。（O+TM+US）组较（O+M）组和（O+TM）组表达明显增加（P0.05）。细胞移植后7d、14d、21d、28d均可检测到eNOS mRNA的表达，与对照组相比，其它各组表达均减少。除对照组外，（O+TM+US）组在各时间段表达量最高，（O+M）组和（O+TM）组次之，（O）组、（O+US）组、（O+MB+US）组最低（P0.05）。细胞移植后28d，HE染色（O）组、（O+US）组、（O+MB+US）组内膜增生最明显，（O+M）组、（O+TM）组和（O+TM+US)新生内膜面积/中膜面积(IA/MA)、管腔狭窄率均低于（O）组、（O+US）组、（O+MB+US）组，且（O+TM+US）组低于（O+M）组和（O+TM）组（P0.05）。同时，PCNA的表达在（O）组、（O+US）组、（O+MB+US）组最高，（O+M）组和（O+TM）组次之，（O+TM+US）组最低（P0.05）。CD31和vWF的表达在（O+TM+US）组最高，（O+M）组和（O+TM）组次之，其余各组几乎无表达（P0.05）。 结论复合体联合超声辐照组较单纯细胞组或单纯复合体组促进细胞归巢及修复损伤血管内皮效果更显著。证实微泡介导声辐射力可增强MSCs归巢修复损伤血管内皮。
[Abstract]:Preparation of a first partially-targeted microvesicle-stem cell complex Objective To prepare a novel targeting microvesicle-stem cell complex Method for constructing targeted microvesicle (MBIC) with anti-ICAM-1 antibody by using 鈥渂iotin-affinity鈥

本文编号：2321661