活性氧调控血小板凋亡及辐射对产板型巨核Meg
本文关键词:活性氧调控血小板凋亡及辐射对产板型巨核Meg-01细胞影响的初步研究,由笔耕文化传播整理发布。
《苏州大学》 2014年
活性氧调控血小板凋亡及辐射对产板型巨核Meg-01细胞影响的初步研究
王秀娟
【摘要】:目的研究Dibucaine(辛可卡因)和Thrombin(凝血酶)对血小板作用过程中活性氧的产生及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其引起凋亡或酶切的作用,以及X射线对血小板凋亡和巨核细胞增殖分化等影响并探讨可能机制; 方法流式细胞术检测活性氧的产生、血小板GPIba的表达和线粒体膜电位的去极化;Western-blot法测定凋亡蛋白Caspase-3和抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达水平和血小板酶切片段GC的表达。予以Meg-01细胞1、3、5、7(Gy)的X射线照射,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞CD41和GPIba的表达以及AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。 结果Dibucaine和Thrombin处理的血小板产生活性氧较对照组分别增加约1.64倍和1.5倍,而用NAC预处理组活性氧的产生明显低于刺激组。Dibucaine单独处理的血小板膜糖蛋白GPIba的表达明显减少,且离心后的上清中GC片段明显增多;而予以NAC(N-乙酰半胱氨酸)、DTT(二硫苏糖醇)等还原剂预先处理后再予以Dibucaine处理,血小板GPIba的表达减低明显受到抑制,上清液GC片段的表达也明显降低。Dibucaine处理组中△Ψm正常血小板为(13.52±3.01)%, NAC+Dibucaine组为(86.30±9.37)%;Thrombin处理组中△Ψm正常的血小板为(76.58±5.28)%,NAC+Thrombin组为(93.00±3.03)%,,差异均有统计学意义(P值均0.001)。Dibucaine处理的血小板,Caspase-3被激活后裂解的小片段明显多于DMSO对照组;预先用NAC处理血小板,再予Dibucaine处理,Caspase-3活化后裂解的小片段明显减少;Dibucaine或Thrombin处理的血小板抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达较DMSO对照组或空白组比较均有所减少;NAC预处理血小板后再予以Dibucaine或Thrombin处理,Bcl-xL的表达较Dibucaine或Thrombin单独处理组明显增多。予以2.5Gy~10Gy X射线照射,血小板线粒体膜电位和GPIba有小幅波动,但没有显著性差异。产板型巨核Meg-01细胞受到剂量大于3Gy的单次X射线照射后24小时,增殖能力较对照组明显受到抑制,CD41或GPIba的表达较对照组明显增多,细胞受到照射后48小时,凋亡较对照组比较无显著差异,但3Gy以上照射的细胞坏死较对照比较有明显差异。 结论Dibucaine或Thrombin引起的血小板凋亡过程中,活性氧参与了其酶切和凋亡的调控;抗氧化剂NAC可明显抑制Dibucaine或Thrombin引起的血小板酶切与凋亡,并且主要是通过对活性氧的抑制或清除来发挥抗凋亡等作用的;2.5Gy~10Gy的X射线照射不能引起血小板的凋亡与酶切。产板型巨核Meg-01细胞受到剂量大于3Gy的单次X射线照射,增殖明显受到抑制,而分化程度明显增加,细胞有晚期坏死的发生。此研究结果对进一步探讨血栓与止血、血小板减少以及辐射对造血系统的损伤具有一定的临床意义,其研究成果有望应用于相关疾病的治疗或指导新药的研发。
【关键词】:
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R815
【目录】:
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