9.4T离体型核磁共振频谱对亚硒酸钠诱导大鼠细胞凋亡时胆碱类物质变化的定量分析

发布时间：2020-04-20 13:07

【摘要】： 目的通过应用Bruker公司的Avance 9.4T液态离体型高场强、高分辨率核磁共振频谱仪定量分析亚硒酸钠染毒后,大鼠肝脏急性损伤而发生细胞凋亡时,胆碱复合物的变化。方法:20只雄性Wistar大鼠随机分成对照及实验两组,每组10只。实验组按20mmol/kg予以亚硒酸钠溶液腹腔注射染毒,对照组仅给予1ml/kg剂量的蒸馏水进行腹腔注射。所有大鼠均牺牲并取得肝脏。1H-MRS数据采集使用离体型9.4T高分辨率核磁共振频谱仪(Bruker Avance 400 MHz )。所得频谱在频率域经XWINNMR (Bruker GmBH)软件初步处理后,再应用MestRe-c 4.3软件进一步分析。HE及TUNEL染色被使用来观察和确定肝脏细胞的变化。结果:质量良好的高氯酸提纯大鼠肝组织物氢质子频谱被获得,常规的肝脏各种水溶性代谢物被探测到并被定位。通过软件积分及公式计算,总胆碱混合物的浓度在对照组是5.08+0.97mmol/L,实验组浓度3.81+1.16;游离胆碱浓度在对照组浓度为1.07+0.23 mmol/L,实验组为0.65+0.20。两组物质在两组间存在统计学意义(p值分别为P0.05和p0.01)。但是比较两组间的合成胆碱(主要含有磷酸胆碱及甘油磷酸胆碱)浓度却不存在统计学意义(p0.05)。HE组织学检测,在100倍光镜下发现实验组的肝窦较对照组的增宽,400倍镜下可见实验组肝脏细胞形态不规则,边界不清,胞浆内可见体积增大,数目增多的类圆型的空泡形成,存留细胞质较浓,浓染的、存留的随意散布的染色质被观及,部分细胞核核仁消失,视野内未见明显的炎症反应。实验组及对照组发生凋亡的肝脏细胞均被TUNEL染色染成棕色而证实。结论:高剂量、高浓度的亚硒酸钠溶液能导致大鼠肝脏损伤,在活体内引起肝细胞凋亡。离体型高分辨率核磁共振频谱能探测到各种不同的代谢物。在细胞凋亡早期,胆碱混合物的不同成分变化倾向不完全一致。
【图文】：

离体,高分辨率,一体机

汕头大学医学院硕士毕业论文图2－1 9.4T离体型高分辨率核磁共振扫描仪（Bruker Avance 400 MHz）Fig 2－1 in vitro 9.4T high resolution magnetic resonance spectrometer（BrukerAvance 400 MHz）冻干浓缩一体机：FREEZE DRY SYSTEM /FREEZONE 4.5冻干浓缩一体机，是美国LABCONCO推出的新型冻干浓缩一体机。主要特点为能在低温条件下将样品中的水分除去，，以达到干燥及长期保存的效果；微量电子天平：瑞士梅特勒－托利多（Mettle Toledo）公司制造，型号为UMX2；德国Eppendorf加样枪；德国Eppendorf高速台式低温离心机以离心管；超低温冰箱：New Brunswick Scientific（NBS）公司生产的U410型号；高速匀浆机；50 ml及100ml烧杯；xO钵及

线图,胆碱,模拟谱,复合物

作用为内标准。D2O的作用是锁场。每一个样本数据采集均在离体型 9.4T高分辨率核振频谱仪 (Bruker Avance 400 MHz)进行。提纯物频谱通过含有抑水脉冲的 Bruker z列获得。带宽为5000 Hz ，采集数据点为4096, 扫描次数为128次，总扫描时间为。频谱在频率域上经机器自带的 XWINNMR (Bruker GmBH)软件初步处理, 处理过程包括傅立叶转换、相位更正、基线更正及位移更正。代谢物的化学位移通过参照TMS置确定。核磁共振频谱数据通过MestRe-c 4.3进一步分析。2.5 统计学分析通过应用MestRe-c 4.3软件对化学位移为各种胆碱复合物及TMSP的代谢峰分别进行面积计算及积分处理，其过程简而言之为：首先应用软件对所要积分的峰进行筛选，应用软件自带的谱线拟和功能对谱线进行模拟，得到新的谱线，新模拟谱图如下图1示。
【学位授予单位】：汕头大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R445.2

【参考文献】