EGCG对人皮肤细胞的辐射防护作用及机制研究

发布时间：2017-05-27 15:04

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【摘要】：目的研究EGCG对人皮肤HaCaT细胞放射敏感性的影响，进一步探讨表没食子儿茶素没食子酸脂（EGCG）对人正常皮肤角质细胞HaCaT的辐射保护作用及其机制。 方法选取人永生化正常皮肤角质细胞HaCaT作为实验细胞。（1）利用四氮唑盐比色试验（MTT）测定EGCG或联合X射线对HaCaT细胞活力的影响，筛选出合适的EGCG的浓度进行后续的实验；（2）给予不同剂量X射线照射，应用克隆形成实验，检测EGCG对HaCaT细胞存活分数及放射敏感性的影响；（3）流式细胞术检测EGCG联合X射线作用后，HaCaT细胞凋亡及周期分布的改变情况；（4）荧光显微镜观察EGCG联合X射线后HaCaT细胞线粒体及ROS的变化；（5）应用Western-blot法分析EGCG联合X射线作用后，细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及氧化应激相关蛋白HO-1、SOD等的表达水平的变化；（6）免疫荧光实验检测Nrf2表达变化；（7）MTT法检测HO-1siRNA或SnPP联合EGCG后辐射防护作用；（8）荧光素酶活性检测HO-1的诱导表达；（9）免疫组化法观察EGCG对皮肤的诱导表达。 结果（1）MTT检测结果显示：EGCG在0-75μmol/L浓度范围内联合X射线可减轻辐射导致的HaCaT细胞活力下降，而没有明显毒性作用；（2）细胞辐射敏感性实验结果显示：EGCG联合辐射组细胞相比单纯照射组，细胞克隆形成率均明显提高（P0.01）。对于HaCaT细胞，单纯照射组和药物+照射组平均致死剂量（D0）值分别为2.43Gy、2.63Gy，准阈剂量（Dq）值分别为1.78Gy、2.53Gy；（3）Annexin Ⅴ/PI双染法凋亡检测结果显示：对于HaCaT细胞，单纯10、20Gy照射组细胞凋亡率分别是9.25%和12.41%，10Gy组经50μM EGCG处理后，细胞凋亡率分别降低至7.82%和10.24%，20Gy组经50μM EGCG处理后，，细胞凋亡率分别降低至6.34%和8.00%，差异有统计学意义(P0.01)；流式细胞仪分析细胞周期显示：在照射剂量点，对于HaCaT细胞，EGCG+照射组与单纯照射组相比，G_0/G_1期细胞比例上升（p0.01），G2/M期细胞比例下降，G_2期阻滞缓解，差异有统计学意义（p0.01）；（5）Western-blot分析显示：对HaCaT细胞，与单纯照射组相比，EGCG+照射组的Bcl-2蛋白表达水平下调，Bax蛋白表达水平增加，而细胞氧化应激相关蛋白HO-1的表达量上升，而SOD没有明显改变；（6）免疫荧光实验检测结果显示：EGCG+照射组HaCaT细胞使Nrf2转录调控因子向核内转移；（6）MTT法显示HO-1siRNA或SnPP联合EGCG后辐射防护作用减轻；（7）荧光素酶活性检测EGCG可以诱导HO-1的表达；（8）免疫组化法观察EGCG可诱导大鼠皮肤组织的HO-1的表达。 结论EGCG对人皮肤HaCaT细胞具有辐射保护作用，EGCG可能通过清除X射线引起的HaCaT细胞内的自由基，缓解G2期阻滞，改变凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax及氧化应激相关蛋白HO-1的表达等途径从而发挥辐射保护作用。
【关键词】：EGCG 辐射防护作用 皮肤HaCaT细胞 HO-1
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R818.74
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 EGCG 对人皮肤细胞的辐射防护作用研究12-35
• 前言12-13
• 材料和方法13-17
• 结果17-30
• 讨论30-35
• 第二部分 EGCG 对人皮肤细胞的辐射防护作用机制的研究35-52
• 材料和方法36-41
• 结果41-48
• 讨论48-52
• 第三部分 EGCG 诱导 HO-1 的体内实验研究52-58
• 材料和方法52-53
• 结果53-56
• 讨论56-58
• 结论58-59
• 参考文献59-63
• 综述63-74
• 参考文献69-74
• 发表论文及其它74-75
• 缩略词表75-76
• 致谢76-77

【共引文献】

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本文编号：400311