脐带间充质干细胞对神经炎症反应及神经干细胞分化的调节作用

发布时间：2017-08-14 05:07

  本文关键词：脐带间充质干细胞对神经炎症反应及神经干细胞分化的调节作用

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【摘要】：目的放疗相关的的认知功能损伤的发生主要与小胶质细胞细胞过度激活所致的慢性神经系统炎症反应及神经发生减少有关。本研究通过观察人脐带间充质干细胞对小胶质细胞增值及活化的影响以及对神经干细胞分化能力的影响,研究人脐带间充质干细胞神经系统炎症反应以及神经发生的调节作用,为今后临床治疗放疗相关的认知功能损伤提供新思路,同时为间充质干细胞的临床应用开辟新领域。方法利用脂多糖(LPS)刺激小胶质细胞模拟神经炎症反应,将BV2细胞与人脐带间充质干细胞来源的条件培养基(h UC-MSCs-CM)和(或)脂多糖(LPS)共培养24或48小时后利用MTT比色法分析BV2增殖活力的变化;ELISA法分析BV2细胞上清中TNF-a和IL-6的变化;免疫印迹法检测精氨酸酶1(Arg1)的表达;real-time PCR分析TNF-a、IL-6、ARG1基因的表达水平。利用transwell小室将NE-4C细胞分别与M1、M2型小胶质细胞进行隔离共培养48h后,应用免疫印迹法检测GFAP、β3-Tubulin和β-catenin蛋白的表达情况。结果1 BV2在LPS长程刺激下表现出明显的增殖效应,而h UC-MSCs-CM可以抑制这种增殖反应;2 LPS刺激诱导BV2大量分泌TNF-a和IL-6两种炎症因子,而在h UC-MSCs-CM和LPS共刺激时TNF-a和IL-6的表达明显低于LPS单刺激组;3 h UC-MSCs-CM共培养组BV2细胞高表达Arg1;4 M2型小胶质细胞与NE-4C共培养组GFAP及β-catenin的表达升高,而β3-Tubulin的表达未见明显改变。结论1脐带间充质干细胞抑制炎症所致的小胶质细胞增殖。2脐带间充干细胞抑制小胶质细胞释放炎症因子TNF-a和IL-6。3脐带间充干细胞能够调节小胶质细胞向M2型活化。4 M2型小胶质细胞可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进神经干细胞向星形胶质细胞分化。
【关键词】：小胶质细胞 神经保护作用 脐带间充质干细胞 免疫调节 神经干细胞 Wnt/β-catenin信号通路
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 英文缩略表8-9
• 引言9-12
• 第1章 实验研究12-43
• 1.1 材料与方法12-25
• 1.1.1 实验所用细胞系12
• 1.1.2 主要实验试剂及耗材。12-13
• 1.1.3 细胞培养耗材13
• 1.1.4 主要实验仪器设备13-14
• 1.1.5 主要试剂缓冲液的配置14-16
• 1.1.6 实验方法16-24
• 1.1.7 实验分组24-25
• 1.1.8 统计学分析25
• 1.2 实验结果25-32
• 1.2.1 hUC-MSCs-CM和LPS对BV2增殖活力的影响25-26
• 1.2.2 不同处理组BV2细胞TNF-α 和IL-6 分泌水平的变化26-27
• 1.2.3 不同处理组BV2细胞TNF-α 和IL-6mRNA表达水平的变化27-28
• 1.2.4 不同处理组BV2细胞ARG1和CD206mRNA的相对表达水平28-29
• 1.2.5 不同处理组BV2细胞中Arg1蛋白的表达情况29-30
• 1.2.6 不同诱导条件下NE-4C细胞表达GFAP、β3-Tubulin的不同30-31
• 1.2.7 不同诱导条件下NE-4C细胞中 β-catenin表达水平的不同31-32
• 1.3 讨论32-37
• 1.3.1 脐带间充质干细胞与免疫调节32-34
• 1.3.2 神经发生与辐射认知障碍34-35
• 1.3.3 M2型小胶质细胞的神经保护作用35-36
• 1.3.4 Wnt/β-catenin信号通路与神经发生36-37
• 1.4 结论37
• 参考文献37-43
• 第2章 综述 间充质干细胞对中枢神经系统疾病的免疫调控研究进展43-53
• 2.1 引言43-44
• 2.2 阿尔茨海默病44-45
• 2.3 脊髓损伤45
• 2.4 缺血性脑卒中45-47
• 2.5 结论47
• 参考文献47-53
• 结论53-54
• 附录A 基因扩增曲线、溶解曲线、溶解峰54-59
• 内参基因action扩增曲线54
• 内参基因action溶解曲线54
• 内参基因action溶解峰54-55
• TNF-α 基因扩增曲线55
• TNF-α 基因溶解曲线55
• TNF-α 基因溶解峰55-56
• IL-6 基因扩增曲线56
• IL-6 基因溶解曲线56
• IL-6 基因溶解峰56-57
• ARG1基因扩增曲线57
• ARG1基因溶解曲线57
• ARG1基因溶解峰57-58
• CD206基因扩增曲线58
• CD206基因溶解曲线58
• CD206基因溶解峰58-59
• 致谢59-61
• 导师简介61-62
• 作者简介62-63
• 学位论文数据集63

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