复方鞣花酸纳米脂质超声微泡的研制及其体内超声成像实验研究

发布时间：2017-09-21 01:27

  本文关键词：复方鞣花酸纳米脂质超声微泡的研制及其体内超声成像实验研究

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【摘要】：目的:以青果和青栀子为原料提取纯化高纯度鞣花酸和栀子苷提取物,以此制备一种同时载鞣花酸和栀子苷的复方纳米脂质超声微泡,并通过动物实验评价其显影效果。方法:采用高效液相色谱法测定青果药材中的鞣花酸,以及青栀子药材中的栀子苷的含量。以青果和栀子为原料,采用单因素实验分别考察药材颗粒度、提取溶剂、溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间等对鞣花酸和栀子苷粗提物纯度的影响。采用高速逆流色谱和大孔树脂纯化鞣花酸和栀子苷,以获得高纯度提取物。按一定比例,将鞣花酸精提物、栀子苷精提物、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、甘油及磷酸盐缓冲液(PBS)混匀,以全氟丙烷为包裹气体,采用机械振荡法制备纳米脂质超声微泡。通过光学显微镜及电子显微镜考察微泡的形态、分散度、均一性及浓度,利用激光粒径检测仪及表面电位检测仪分别检测微泡的粒径大小及分布、表面电位等物理特性;采用高效液相色谱检测包封率和载药量,并作初步稳定性研究。经兔耳缘静脉注入自制纳米脂质超声微泡,采用自身前后对照的方法,观察兔肝脏部位及肝脏肿瘤部位超声显影效果,为超声定位靶向给药提供了直接可靠的依据。结果:以鞣花酸和栀子苷为对照品,采用高效液相色谱法测定了青果和青栀子中鞣花酸和栀子苷的含量。鞣花酸和栀子苷分别在0.043~2.160μg、0.419~20.934μg浓度范围内线性关系良好。其精密度、稳定性和重复性的RSD均低于3%。鞣花酸平均回收率为97.69%,RSD=1.17%(n=9),栀子苷的平均回收率为98.75%,RSD=0.81%(n=9)。通过单因素试验获得青果中鞣花酸的最佳提取工艺为:将青果粉碎为细粉,加入料液比为1:12(g:m L)的80%的丙酮溶液,80℃回流提取2h,最后得到纯度为16.52%的鞣花酸粗提物。青栀子中栀子苷的最佳提取工艺为:将青栀子粉碎为细粉,加入料液比为1:5(g:m L)的70%的乙醇溶液,80℃回流提取3h,最后得到纯度为35.78%的栀子苷粗提物。以异丙醇∶正丁醇∶水=1∶2∶3为溶剂系统,采用高速逆流色谱分离纯化青果中鞣花酸粗提物,一次分离纯化,从100g青果中得到的纯度为93.67%的鞣花酸精提物1.82 g,得率为77.08%。采用X-5大孔树脂纯化栀子苷粗提物,从100g青栀子中得到的纯度为91.26%的栀子苷精提物11.37 g,得率为85.69%。自制载鞣花酸和栀子苷的纳米脂质微泡大小均匀,平均粒径为(526.8±96.4)nm,平均表面电位为-(5.3±0.9)m V,平均浓度为(3.86±0.72)×109/m L;鞣花酸和栀子苷的包封率分别为92.65±1.32%,87.39±1.05%;载药量分别为23.15±0.97%,21.85±0.83%。经静脉注射后,该纳米脂质微泡能明显增强兔肝脏的二维灰阶显像。结论:自制纳米脂质超声微泡形态较好,粒径均匀,具有良好的显影增强效果,为实现肿瘤血管外靶向显影与治疗研究提供了一个前期研究基础。
【关键词】：鞣花酸 栀子苷 青果 栀子 超声微泡 纳米 脂质 造影 肝脏
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R445.1;R284
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-16
• 第一章 鞣花酸和栀子苷的提取纯化16-40
• 1 材料与仪器16-18
• 1.1 实验材料16
• 1.2 实验仪器16-17
• 1.3 试剂与试药17-18
• 2 实验方法18-25
• 2.1 青果中鞣花酸的提取纯化18-21
• 2.1.1 青果中鞣花酸的含量测定18-20
• 2.1.2 青果中鞣花酸提取工艺研究20-21
• 2.1.3 青果中鞣花酸的纯化研究21
• 2.2 栀子中栀子苷的提取纯化21-25
• 2.2.1 栀子中栀子苷的含量测定21-23
• 2.2.2 栀子中栀子苷提取工艺研究23-25
• 2.2.3 青栀子中栀子苷的纯化研究25
• 3 实验结果25-36
• 3.1 青果中鞣花酸的提取纯化25-31
• 3.1.1 青果中鞣花酸的含量测定25-28
• 3.1.2 青果中鞣花酸提取工艺研究28-29
• 3.1.3 青果中鞣花酸的纯化研究29-31
• 3.2 栀子中栀子苷的提取纯化31-36
• 3.2.1 栀子中栀子苷的含量测定31-33
• 3.2.2 栀子中栀子苷提取工艺研究33-35
• 3.2.3 青栀子中栀子苷的纯化研究35-36
• 4 讨论36-38
• 5 结论38-40
• 第二章 复方鞣花酸纳米脂质超声微泡制备工艺及一般特性研究40-51
• 1 材料与仪器40-41
• 1.1 药品和试剂40-41
• 1.2 实验仪器41
• 2 实验方法41-44
• 2.1 载药纳米脂质超声微泡的制备41-42
• 2.2 载药纳米脂质超声微泡一般特性研究42
• 2.3 HPLC测定超声微泡包封率和载药量42-43
• 2.4 超声微泡初步稳定性研究43-44
• 2.5 超声破坏载药微泡控释药物的定性研究44
• 3 实验结果44-47
• 3.1 载药超声微泡的一般特性测定44-45
• 3.2 载药超声微泡的包封率和载药量检测45-46
• 3.3 超声微泡初步稳定性研究46-47
• 3.4 超声辅助微泡药物释放研究47
• 4 讨论47-50
• 5 结论50-51
• 第三章 复方鞣花酸纳米脂质超声微泡的体内超声成像实验51-56
• 1 材料与仪器51
• 1.1 实验材料51
• 1.2 实验仪器51
• 1.3 实验动物51
• 2 实验方法51-52
• 2.1 对照组肝脏超声成像51
• 2.2 实验组肝脏超声成像51
• 2.3 对照组肝脏肿瘤超声成像51-52
• 2.4 实验组肝脏肿瘤超声成像52
• 3 实验结果52-53
• 3.1 肝脏超声成像52
• 3.2 肝脏肿瘤超声成像52-53
• 4 讨论53-55
• 5 结论55-56
• 参考文献56-62
• 英汉缩略词对照表62-63
• 综述63-78
• 参考文献74-78
• 致谢78-79
• 硕士研究生在读期间发表的论文、研究项目及学术交流情况79-81

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：891586