大鼠放射性肝损伤分子应答及机制研究

发布时间：2017-09-28 01:09

  本文关键词：大鼠放射性肝损伤分子应答及机制研究

  更多相关文章： 放射性肝损伤 Kupffer细胞 TGF-β1/Smads信号通路 NF-κBp65

【摘要】：研究目的:通过观察放射性肝损伤(RILD)大鼠模型中的相关细胞因子的表达水平变化,①找到减少放射性肝损伤作用和早期诊断损伤发生的生物标记分子以及引起相关信号通路改变的关键靶点;②分析并引发RILD的潜在机制和治疗RILD的潜在靶点。研究方法:利用单次照射总剂量20Gy建立SD大鼠放射性损伤模型。完成放疗后,观察大鼠存活情况和精神、活动、皮毛,体重以及饮食等状态,在各时间点处死大鼠前检测大鼠体重变化。在放疗完成后3d,1,2,4,8,12周后分别取肝组织和血液样本。分析大鼠血清中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(Procollagen-Ⅲ,PC-Ⅲ),以及IV型胶原(IV-C)的改变,用于分析放射性肝损伤后,肝纤维化的改变。HE染色和Masson染色法进行大鼠放射性肝损伤组织学分析,TUNEL试剂盒分析放射性肝损伤凋亡情况。免疫组化分析放射性肝损伤细胞因子和生长因子表达情况。Real-time PCR检测大鼠放射性肝损伤细胞因子变化。Western blot检测大鼠放射性肝损伤细胞因子蛋白变化。分离,纯化并培养原代大鼠Kupffer细胞;免疫组化法鉴定Kupffer细胞表面标记F4/80表达。随机分为对照组,放射组和氯化钆组。MTT法分别检测各组细胞增殖情况。Caspase3凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡情况。ELISA法和Real-timePCR检测各组细胞因子和生长因子的分泌变化。结果:1)接受照射总剂量20Gy的照射后,放射性肝损伤实验组大鼠的体重降低,与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,放射性肝损伤实验组大鼠体重从放射结束后第2周就逐渐降低,一直持续至第12周研究结束,差异具有统计学意义(P0.05);2)放射性肝损伤组大鼠血清AST、ALT、ALP酶活性在受照射后第2周开始升高,照射后直至研究结束的第12周达到高峰(P0.05)。总胆红素和直接胆红素水平无统计学意义;3)透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ),以及IV型胶原(IV-C)在照射后,变化不显著;4)HE染色和Masson染色可见放射性肝损伤病理改变随放射后时间增加而明显;5)放射肝损伤后大鼠肝细胞凋亡增加;6)免疫组化显示TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF在放射性肝损伤后都呈阳性表达,且随着放射完成时间的延长,而表达增加更加明显;7)Realtime PCR和Western blot结果显示TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF在放射性肝损伤后在不同时间点表达增加,且增加程度各异差异,具有统计学意义(P0.05);8)原代培养的Kupffer细胞具有典型的巨噬细胞特征,纯度高,经鉴定F4/80表达阳性;9)接受放射后可促进Kupffer细胞的增殖(P0.05);而应用Kupffer细胞抑制剂氯化钆作用后,Kupffer细胞增殖被抑制(P0.05)。接受照射可抑制Kupffer细胞Capase3的活性加(P0.05);而应用Kupffer细胞抑制剂氯化钆作用后,Kupffer细胞Capase3的活性增加,差异具有统计学意义(P0.05);10)在放射活化的Kupffer细胞中TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF表达明显增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。加入氯化钆作用后,可抑制细胞因子和生长因子的表达,与照射组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:TGF-β1/Smads信号通路和NF-κB/p65信号通路参与调控放射性肝损伤。放射可引起Kupffer细胞增殖,活化。放射后激活Kupffer细胞可引起TGF-β1/Smads信号通路和NF-κB/p65信号通路活化。氯化钆的应用可有效抑制放射引起的Kupffer细胞活化,进而抑制TGF-β1/Smads信号通路和NF-κB/p65信号通路活化,从而为临床研究和治疗放射性肝损伤提供理论基础和参考依据。
【关键词】：放射性肝损伤 Kupffer细胞 TGF-β1/Smads信号通路 NF-κBp65
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55;R735.7
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-20
• 第一部分 大鼠放射性肝损伤模型的建立20-36
• 1 材料与方法20-27
• 1.1 实验材料20-24
• 1.2 实验方法24-27
• 1.3 统计学分析27
• 2 结果27-31
• 3 讨论31-35
• 4 小结35-36
• 第二部分 大鼠放射性肝损伤的分子应答36-61
• 1 材料与方法36-45
• 1.1 实验材料36-40
• 1.2 实验方法40-45
• 1.3 统计学分析45
• 2 结果45-53
• 3 讨论53-60
• 4 小结60-61
• 第三部分 影响大鼠放射性肝损伤的分子应答机制的研究61-80
• 1 材料与方法61-65
• 1.1 实验材料61-63
• 1.2 实验方法63-65
• 1.3 统计学分析65
• 2 结果65-71
• 3 讨论71-79
• 4 小结79-80
• 结论80
• 创新性和展望80-81
• 致谢81-82
• 参考文献82-98
• 综述98-114
• 参考文献107-114
• 攻读博士学位期间获得的学术成果114-115
• 个人简历115-116
• 导师评阅表116

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本文编号：932938