低强度脉冲超声促进周围神经损伤后再生的实验研究

发布时间：2017-10-07 01:15

  本文关键词：低强度脉冲超声促进周围神经损伤后再生的实验研究

  更多相关文章： 低强度脉冲超声 超声造影 周围神经 再生 雪旺细胞

【摘要】：目的探索低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound, LIPUS)照射是否促进雪旺细胞(Schwann cells, SCs)及大鼠坐骨神经缺损自体神经翻转移植术后轴突的生长,寻求最佳超声照射剂量,同时初步探索其作用机制。方法1.采用250mW/cm2,500mW/cm2和750mW/cm2三个强度的LIPUS照射体外培养的SCs,每天一次,每次5分钟,在照射的第1、2、3、5、7天,分别用S100免疫荧光染色法及CCK8法检测LIPUS照射后SCs的生长及增殖情况；RT-PCR技术检测S100、GFAP、CNTF、BDNF的表达水平。2.建立SD大鼠坐骨神经10mm缺损自体神经翻转移植模型,术后分别应用上述三个强度LIPUS经皮照射移植处的坐骨神经,隔天一次,每次5分钟,持续照射2-12周,通过坐骨神经功能恢复评价、超声造影肌肉灌注评价、电生理评价、NF200免疫荧光法染色、再生有髓鞘神经半薄切片后甲苯胺蓝染色、再生有髓鞘神经超薄切片后透射电镜观察、大鼠腓肠肌肌肉湿重恢复率、大鼠腓肠肌横截面Masson染色及肌纤维横截面积比较、Western blot法检测腓肠肌NF-κB p65表达等方法评价超声对移植神经生长的作用。3.超声引导下将温度探针放入SD大鼠坐骨神经周围,监测250mW/cm2, 500mW/cm2和750mW/cm2三个不同强度LIPUS经皮照射坐骨神经5分钟的过程中温度变化情况。结果1.普通光镜和S100免疫荧光染色结果均显示：接受照射第2天,实验组的SCs数量均多于对照组，低剂量组最多。CCK8检测结果如下：照射第1天,各组SCs增殖无明显差异(P0.05)；照射第3、5、7天,低剂量组和中剂量组细胞增殖均明显高于高剂量组和对照组(P0.01)。2.照射第3天和第7天,实验组S100、CNTF、BDNF的表达均显著高于对照组(P0.05),以低剂量组最高,实验组GFAP的表达显著低于对照组(P0.05),以低剂量组最低。3.第2周起低剂量组坐骨神经功能恢复明显优于其他组(P0.05)。第4周起低剂量组的PI和AUC明显高于其他组(P0.05)。第12周时低剂量组和中剂量组的动作电位波幅峰值和电生理曲线下面积的恢复指数均显著高于其他两组,以低剂量组最高(P0.05)。第12周时低剂量组再生有髓神经纤维的密度、厚度及轴突直径均最大(P0.05)。第8周时低剂量组轴突生长最快。低剂量组的腓肠肌肌肉湿重恢复率和肌纤维横截面积均大于其他组(P0.05)。从第4周起低剂量组腓肠肌NF-κB p65表达均低于其他各组。各组PI和AUC与动作电位波幅峰值和电生理曲线下面积的恢复指数呈高度线性正相关(r均0.70),与腓肠肌NF-κB p65表达呈高度线性负相关(r绝对值均0.70)。4.三个剂量实验组在照射起点时、终点时的即刻温度及治疗过程中最高温度均无明显改变(P0.05)。结论三个剂量LIPUS照射能促进SCs的生长、增殖、表型及分泌功能,也能促进大鼠坐骨神经缺损自体神经翻转移植术后的轴突生长,以250mW/cm2组的促进作用最为显著。三种不同剂量LIPUS照射坐骨神经时局部温度变化不明显,热效应不是其治疗作用的主要因素。
【关键词】：低强度脉冲超声 超声造影 周围神经 再生 雪旺细胞
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R445.1;R745
【目录】：

• 缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 不同剂量低强度脉冲超声促进离体雪旺细胞增生的研究14-35
• 引言14-15
• 实验一 不同剂量低强度脉冲超声对离体雪旺细胞生长及增殖的促进作用15-25
• 实验材料15-17
• 实验方法17-20
• 实验结果20-23
• 讨论23-24
• 结论24-25
• 实验二 不同剂量低强度超声对雪旺细胞表型及分泌功能的促进作用25-35
• 实验材料25-27
• 实验方法27-30
• 实验结果30-33
• 讨论33-34
• 结论34-35
• 第二部分 不同剂量低强度超声促进移植段周围神经轴突再生的研究35-75
• 引言35-36
• 实验一 不同剂量低强度超声促进移植段周围神经轴突再生的研究36-69
• 实验材料36-39
• 实验方法39-45
• 实验结果45-66
• 讨论66-69
• 结果69
• 实验二 不同剂量低强度超声在促进移植段神经轴突再生时温度变化的研究69-75
• 实验材料70
• 实验方法70-71
• 实验结果71-74
• 讨论74
• 结论74-75
• 综述75-91
• 参考文献83-91
• 攻读学位期间成果91-93
• 致谢93

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本文编号：986086