EGCG对小鼠合子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达的影响

发布时间：2017-03-21 15:09

  本文关键词：EGCG对小鼠合子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠体外发育1-细胞胚至2-细胞胚过渡的影响,研究EGCG对小鼠合子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达水平的改变,为进一步探讨EGCG影响小鼠植入前胚体外发育的机制提供实验和理论依据。方法:1.以空白M16培养液为对照组,在M16中添加浓度为10μg/ml、20μg/ml EGCG为实验组,收集昆明(kunming,KM)小鼠1-细胞胚(h CG后21h)。(1)进行体外连续培养,计数各组发育至2-细胞胚、4-细胞胚、桑葚胚和囊胚的数目,并以1-细胞胚为基数,计算各组至不同阶段的发育率。(2)M16组及20μg/ml EGCG组的1-细胞胚体外培养至h CG后33h,利用荧光显微镜分别对磷酸化组蛋白H3阳性和阴性的1-细胞胚数量进行计数,同时在倒置显微镜下计数2-细胞胚数量,观察EGCG对1-细胞胚至2-细胞胚过渡的影响。。2.取h CG后21h 1-细胞胚分别在M16及20μg/ml EGCG培养液中体外培养至h CG后27h,收集1-细胞胚。(1)激光扫描共聚焦显微镜检测e IF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋白的表达定位情况。(2)Realtime-PCR检测合子基因组激活相关基因e IF1A、Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Sox2与Oct4的m RNA水平。3.取h CG后27h 1-细胞胚分别在M16及20μg/ml EGCG培养液中体外培养至h CG后45h,收集2-细胞胚。(1)激光扫描共聚焦显微镜检测e IF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋白的表达定位情况。(2)Realtime-PCR检测合子基因组激活相关基因e IF1A、Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Sox2与Oct4的m RNA水平。结果:1.添加EGCG实验组的1-细胞胚体外培养各阶段的发育率明显高于M16组。添加20μg/ml EGCG的实验组1-细胞胚至2-细胞胚的过渡率明显高于对照组(P0.01),且未到2-细胞胚的1-细胞胚发育至M期的比率也高于M16组(P0.05)。2.体外培养的1-细胞胚(h CG后21h至27h):(1)激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示:EGCG组1-细胞胚核内ZSCAN4和SOX2荧光染色相对强度明显高于M16组,其差异有统计学意义(P0.01),而1-细胞胚核内e IF1A和OCT4荧光染色相对强度略高于M16组,其差异无统计学意义。(2)Realtime-PCR检测结果显示:EGCG组合子基因组激活相关基因Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Oct4的m RNA表达水平均高于M16组,其差异具有统计学意义(P0.01)。e IF1A和Sox2的m RNA表达水平略高于M16组,其差异无统计学意义(P0.05)。3.体外培养的2-细胞胚(h CG后27h至45h):(1)激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示:EGCG组2-细胞胚核内ZSCAN4和OCT4荧光染色相对强度明显高于M16组,且差异有统计学意义(P0.01),2-细胞胚核内e IF1A和SOX2荧光染色相对强度略高于M16组,其差异无统计学意义(P0.05)。(2)Realtime-PCR检测结果显示:EGCG组合子基因组激活相关基因Mu ERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Oct4的m RNA表达水平高于M16组,且差异有统计学意义(P0.01)。e IF1A、Zscan4d及Sox2的m RNA表达水平略高于M16组,差异都无统计学意义(P0.05)。结论EGCG可以显著提高小鼠胚胎体外发育1-细胞胚至2-细胞胚的过渡率,促进植入前胚早期的细胞周期进程。EGCG组1-细胞胚内合子基因组激活相关基因Zscan4d、Mu ERV-L、Hsp70.1以及干细胞因子Oct4的m RNA水平明显高于M16组,且SOX2的蛋白水平也明显升高,说明EGCG可能调控小规模合子基因组的激活以及SOX2、Oct4的表达,促进1-细胞胚向2-细胞胚过渡。其次,EGCG组2-细胞胚内e IF1A、Mu ERV-L、Hsp70.1与Oct4的m RNA或蛋白水平也明显提高。这些结果显示,EGCG可能通过调节合子基因组的激活及干细胞因子的表达水平,促进植入前胚的体外发育。
【关键词】：表没食子儿茶素没食子酸酯 植入前胚 合子基因组激活 干细胞因子
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.8
【目录】：

• 英语缩略语表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分 EGCG 对小鼠 1-细胞胚合子基因组激活和干细胞因子 Sox2 与 Oct4 表达的影响11-34
• 1 实验材料12-17
• 2 方法17-22
• 3 结果22-30
• 4 讨论30-34
• 第二部分 EGCG 对小鼠 2-细胞胚合子基因组激活和干细胞因子 Sox2 与 Oct4 表达的影响34-47
• 1 实验材料35-37
• 2 方法37-38
• 3 结果38-44
• 4 讨论44-47
• 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-61
• 参考文献58-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 尚利青;张丽;郑爱燕;邹恒;李拥军;;不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟受精的影响[J];中国草食动物;2009年02期

2 于华忠,张东山,龚竹琼;茶叶中EGCG含量分析研究[J];福建茶叶;2004年04期

3 邵根宝;高爱民;徐银学;丁红梅;贾超;刘红林;;小鼠植入前胚胎MuERV-L基因表达特征研究[J];南京农业大学学报;2007年04期

4 谷亚轻;李琳;尹萍;季金强;李拥军;;EGCG对小鼠卵母细胞成熟的影响[J];上海畜牧兽医通讯;2008年03期

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本文编号：259834