子宫内膜癌抑癌基因甲基化及UHRF1复合体表观遗传调控的研究

发布时间：2017-03-22 05:13

  本文关键词：子宫内膜癌抑癌基因甲基化及UHRF1复合体表观遗传调控的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：为子宫内膜癌(Endometrial carcinoma, EC)的诊断寻找新的甲基化标志物,并进一步探索EC关键抑癌基因的表观遗传调控机制。研究方法：(1)运用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR, MSP)法检测155例子宫内膜标本(正常内膜27例,单纯性增生22例,复杂性增生29例,不典型增生18例和子宫内膜样腺癌59例)6个抑癌基因(tumor suppressor genes, TSGs) (CDH13, SHP1, HIN1,DKK3, CTNNA1 和 PCDH8)启动子区的甲基化状态。(2)单独或联合应用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)口曲古抑菌素A (trichostatin A, TSA)处理子宫内膜样腺癌Ishikawa和Kle细胞株,实验分为四组(未处理组,5-Aza-CdR组,TSA组和5-Aza-CdR+TSA组)。运用MSP和实时定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR, qRT-PCR)等实验方法分别检测2个细胞株各组中CDH13和SHP1基因的甲基化状态以及RNA表达水平的变化。(3)运用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)技术检测两个细胞株的各组中UHRF1蛋白是否能够共沉淀PRMT5蛋白以及两者之间的关系。结果：(1)在EC中,CDH13和SHP1启动子区存在着较高的甲基化率(分别为81.36%和86.44%),而其他四个抑癌基因(HIN1, DKK3, CTNNA1 和 PCDH8)的甲基化率则较低(分别为8.47%,15.25%,20.34%和16.95%)。CDH13不仅在EC中的甲基化率较高,在复杂增生和不典型增生中同样出现了较高的甲基化率(分别为51.72%和50.00%),且其甲基化率与患者年龄、肿瘤分化程度以及肿瘤浸润深度存在相关性(p0.05)。SHP1仅在EC中存在较高的甲基化率,且与患者年龄和肿瘤分化程度相关(p0.05)。(2)在Ishikawa和Kle细胞株中：未处理组CDH13和SHP1启动子区处于完全甲基化状态；5-Aza-CdR或TSA单独处理后CDH13和SHP1启动子区甲基化状态被部分逆转,同时RNA的表达量增加(p0.01)；5-Aza-CdR和TSA联合处理组CDH13和SHP1启动子区甲基化状态被完全逆转,且RNA水平显著升高(p0.01)。(3)未处理组、5-Aza-CdR或TSA单独或联合处理组,UHRF1蛋白均能共沉淀PRMT5蛋白,与未处理组相比两者的表达量明显下调(p0.05)。结论：在子宫内膜癌的两个细胞株中,CDH13和SHP1基因启动子区呈高甲基化状态。CDH13的甲基化在EC的早期阶段(包括复杂性增生和不典型增生)既已发生。UHRF1可以通过与PRMT5形成复合体来调控抑癌基因启动子区甲基化的发生。
【关键词】：子宫内膜癌 抑癌基因 表观遗传学 DNA甲基化
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 中英文缩写词对照表10-11
• 前言11-20
• 1 表观遗传学概述12-18
• 2 表观遗传学改变治疗药物18-20
• 材料与方法20-39
• 1 临床资料20-24
• 2 实验方法及步骤24-39
• 结果39-41
• 讨论41-43
• 结论43-44
• 附图表44-49
• 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 攻读学位期间发表的学术论文目录55-56
• 附件56

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本文编号：260932