慢病毒介导的HER2-shRNA对卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性的体内外研究

发布时间：2017-03-22 20:13

  本文关键词：慢病毒介导的HER2-shRNA对卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性的体内外研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨HER2-短发夹状(sh)RNA(HER2-short hairpin RNA,HER2-sh RNA)慢病毒载体体外感染人卵巢癌细胞SKOV3后,建立稳定表达细胞株,研究其生物学行为的变化及其对顺铂化疗敏感性的变化,并通过体内移植瘤实验研究靶向沉默人表皮生长因子受体2(HER2)基因后对卵巢癌化疗敏感性的影响,探索RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在卵巢癌基因治疗方面的可行性。方法:利用本室保存的靶向HER2基因HER2-sh RNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体感染人卵巢癌细胞SKOV3;利用嘌呤霉素加压筛选,建立稳定表达HER2-sh RNA的SKOV3细胞株(KD)及阴性对照细胞株(NC),组成KD组和NC组,以未感染的SKOV3细胞为CON组,体外通过Real time PCR和Western blot技术检测3组细胞的HER2 m RNA及蛋白的表达;Transwell细胞侵袭实验检测3组细胞的侵袭能力;CCK-8法测定3组细胞对不同顺铂浓度(0、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μg/m L)的化疗敏感性的变化;将各实验组细胞接种于裸鼠,经尾静脉注射顺铂注射液(DDP)治疗后,检测各组裸鼠移植瘤的成瘤率、成瘤时间、瘤体大小、瘤体重量;免疫组化测定各实验组HER2蛋白表达。结果:经嘌呤霉素加压筛选获得稳定表达有效干扰序列和阴性对照序列的实验细胞株,通过荧光显微镜观察及流式细胞学检测,NC组和KD组的荧光表达率均在96%以上。Real time PCR结果显示CON、NC、KD组细胞的HER2 m RNA相对含量(HER2/β-actin)分别为1.002±0.078、0.956±0.314、0.047±0.016,KD组HER2 m RNA的含量与CON和NC组相比明显下调,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果显示CON组、NC组及KD组HER2蛋白的相对表达量分别为(0.487±0.012)、(0.447±0.021)和(0.124±0.013),KD组明显低于NC和CON组,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell细胞侵袭实验结果显示KD组细胞侵袭能力显著下降。随着顺铂浓度的增加,三组细胞生长都受到抑制,但KD组细胞生长速度在顺铂浓度"g2.5μg/m L时明显较CON组和NC组慢(P0.05),CON和NC组细胞两组比较无显著差异(P0.05)。体内动物实验结果显示KD组卵巢癌移植瘤经顺铂治疗后较其他组平均瘤体体积、瘤体重量明显减小(P0.05);免疫组化结果亦显示KD+DDP组HER2蛋白的表达明显下调。结论:慢病毒介导的HER2-sh RNA可以有效抑制HER2基因的表达,增加卵巢癌对顺铂的化疗敏感性。
【关键词】：卵巢肿瘤 肿瘤移植 RNA干扰 顺铂
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 实验流程11-12
• 第一部分 HER2-SHRNA慢病毒载体对人卵巢癌细胞SKOV3 的体外实验研究12-32
• 1 材料12-14
• 2. 方法14-20
• 3 实验结果20-29
• 4 讨论29-32
• 第二部分 HER2-SHRNA慢病毒载体对人卵巢癌细胞SKOV3 化疗敏感性的体内实验研究32-39
• 1 材料32-33
• 2 方法33-34
• 3 结果34-37
• 4 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述：HER2 在肿瘤治疗中的研究进展43-52
• 参考文献48-52
• 攻读学位期间公开发表论文52-53
• 中英文对照缩略词表53-54
• 致谢54-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 杨荣;武振华;王玉玲;何欣;康雅琼;尚立娜;;非小细胞肺癌中HER-2和EGFR的表达及其与临床表现的关系[J];临床与实验病理学杂志;2014年07期

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本文编号：262151