宫颈癌HeLa细胞分泌的PGE2抑制巨噬细胞RAW中CCL5产生的机制研究

发布时间：2017-04-05 11:04

  本文关键词：宫颈癌HeLa细胞分泌的PGE2抑制巨噬细胞RAW中CCL5产生的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:宫颈癌是国内外常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率仅次于乳腺癌,且发病有逐年上升和年轻化的趋势。研究显示,炎症与肿瘤的发生发展密切相关,由于肿瘤微环境中免疫抑制性因素的存在,如前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2),使得许多炎症因子无法正常发挥作用,反而起到促瘤作用。为进一步研究宫颈癌患者中炎症与肿瘤的关系,本实验以培养宫颈癌He La细胞收集的上清液作为肿瘤条件培养基(tumor conditioned medium,TCM),观察TCM是否会抑制巨噬细胞RAW中调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES/CCL5)的产生,这种抑制效应是否由肿瘤条件培养基中的PGE2产生,并探讨宫颈癌He La细胞分泌的PGE2对巨噬细胞中CCL5产生的这种抑制效应的机制,为宫颈癌的临床治疗提供新的思路。方法:1制备肿瘤条件培养基(TCM):完全培养基培养对数生长期的浓度为0.6×106/ml的He La细胞,72小时后收集上清,0.45μm滤器过滤,-20℃保存,备用,即为TCM。2培养巨噬细胞RAW,用不同剂量(0,200,400,600μl)的TCM及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(1μg/ml)刺激RAW,观察巨噬细胞RAW中CCL5蛋白和m RNA表达。3使用不同剂量(0,10-13,10-12,10-11,10-10 M)的PGE2及LPS(1μg/ml)刺激巨噬细胞RAW,观察CCL5蛋白和m RNA的表达。4使用抑制剂NS-398抑制PGE2的合成后观察巨噬细胞RAW CCL5蛋白和m RNA的表达情况。5使用PGE2的受体拮抗剂:10μM SC51322(EP1的拮抗剂),3μM AH6809(EP2的拮抗剂)和30μM AH23848(EP4的拮抗剂)及AH6809+AH23848观察巨噬细胞的CCL5蛋白和m RNA的表达情况。结果:1使用不同剂量的TCM与LPS(1μg/ml)刺激巨噬细胞RAW后,巨噬细胞内CCL5蛋白和m RNA的表达均会下降,且这种作用具有剂量依赖性。LPS刺激前后,CCL5的表达差异有统计学意义(P0.05)。LPS+TCM共刺激与LPS单独刺激相比,CCL5的表达差异有统计学意义(P0.05)。2用不同剂量的PGE2及LPS(1μg/ml)刺激巨噬细胞RAW,CCL5蛋白和m RNA的表达均会下降。PGE2的不同剂量组与LPS单独刺激相比,CCL5的表达差异均有统计学意义(P0.05)。3用PGE2的抑制剂NS-398加入He La中制备TCM,用后者刺激巨噬细胞RAW后,CCL5蛋白和m RNA的表达抑制被逆转,提示PEG2是TCM的重要成分,且其在CCL5的表达上发挥着重要的负向调节作用。4用PGE2的受体拮抗剂:10μM SC51322(EP1的拮抗剂),3μM AH6809(EP2的拮抗剂),30μM AH23848(EP4的拮抗剂)及AH6809+AH23848刺激巨噬细胞RAW观察CCL5蛋白和m RNA的表达情况:SC51322对CCL5蛋白和m RNA的表达无影响;AH6809和AH23848均会部分逆转PGE2对CCL5蛋白和m RNA的表达的抑制效应;联合AH6809+AH23848则会完全逆转PGE2对CCL5蛋白和m RNA的表达的抑制效应。Med(培养基,medium)与LPS、LPS与LPS+TCM、LPS+TCM与LPS+TCM+AH6809、LPS+TCM与LPS+TCM+AH23848、LPS+TCM与LPS+TCM+AH6809+AH23848相比,CCL5的表达差异均有统计学意义(P0.05)。结论:肿瘤条件培养基TCM即培养宫颈癌He La细胞制备所得,抑制巨噬细胞RAW中CCL5蛋白和m RNA的表达。根据研究这种抑制效应是由PGE2产生,在实验中使用不同剂量的PGE2刺激巨噬细胞RAW后,同样会抑制巨噬细胞RAW中CCL5蛋白和m RNA的表达,为进一步明确这种抑制效应来源于PGE2,在实验中使用PGE2的抑制剂NS-398即可阻断PGE2的产生及PGE2受体拮抗剂可逆转这种抑制效应,这一结果提示我们宫颈癌He La细胞分泌的PGE2会抑制巨噬细胞RAW中CCL5产生。
【关键词】：宫颈癌 HeLa细胞 巨噬细胞RAW TCM PGE2 CCL5
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-19
• 附图19-22
• 附表22-24
• 讨论24-26
• 结论26
• 参考文献26-29
• 综述 肿瘤免疫抑制微环境的研究29-41
• 参考文献35-41
• 致谢41-42
• 个人简历42

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本文编号：286973