IL-27影响滋养细胞和血管内皮细胞功能参与子痫前期发病的相关机制研究

发布时间：2020-11-14 16:47

　　 目的:我们之前的研究表明IL-27与子痫前期(PE)的发病密切相关,IL-27可诱导滋养细胞产生促炎效应。本研究是为了探究IL-27是否通过影响滋养细胞的功能参与子痫前期的发病以及其相关机制。方法:本研究用CCK-8、Ed U增殖实验和流式凋亡实验检测了IL-27是否能够影响滋养细胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡。然后收取正常早孕期绒毛组织进行绒毛外植体实验,检测IL-27是否影响外植体的外生性生长。通过Transwell和划痕实验检测IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo侵袭和迁移能力的影响。Western Blotting检测IL-27刺激滋养细胞株HTR8/SVneo后上皮间质转化(EMT)标志物的改变。并使用免疫荧光观察IL-27对外植体和滋养细胞株HTR8/SVneo的EMT标志物表达的影响。Western Blotting检测IL-27刺激滋养细胞株HTR8/SVneo后STAT1和STAT3的激活情况。分别使用STAT1 si RNA和STAT3 si RNA转染滋养细胞株HTR8/SVneo后观察IL-27对其侵袭和迁移能力的影响。最后使用Western Blotting检测子痫前期和正常胎盘组织中STAT1的磷酸化水平。结果:IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡并无明显的影响,但可显著抑制其侵袭和迁移的能力,并明显抑制外植体的外生性生长。IL-27可使滋养细胞株HTR8/SVneo的上皮标志物(β-catenin)的表达增强,使其间质标志物(vimentin)的表达减弱。在绒毛外植体试验中,IL-27刺激后的外植体绒毛外滋养细胞的上皮标志物(E-cadherin和β-catenin)的表达增强,而间质标志物(vimentin)的表达减弱。IL-27可以明显激活滋养细胞株HTR8/SVneo中的STAT1和STAT3。选择性抑制STAT1和STAT3的表达后发现,STAT1的表达受到抑制后可削弱IL-27对滋养细胞株HTR8/SVneo的EMT标志物的表达的影响,以及对其侵袭和迁移能力的影响,但抑制STAT3的表达则不能。与正常孕妇相比较,子痫前期孕妇的胎盘组织中STAT1的磷酸化水平是升高的。结论:IL-27可能主要是通过激活STAT1抑制滋养细胞的EMT过程,从而抑制其侵袭和迁移能力参与子痫前期的发病。目的:探讨IL-27参与原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能受损的信号通路,及其在子痫前期发病机制中的作用。方法:(1)使用Western blot检测子痫前期和正常足月胎盘组织中IL-27及其受体WSX-1的表达;(2)分离并培养原代人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光的方法鉴定HUVECs细胞;(3)对原代HUVECs予以50 ng/m L人重组IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法检测JAK2、STAT1的活化情况;(4)使用JAK的特异性抑制剂AG490处理原代HUVECs后,分为六个处理组,分别是空白对照组(Con)、DMSO组、抑制剂组(AG490),IL-27处理组(IL-27)、IL-27和DMSO共同处理组(DMSO+IL-27)、IL-27和抑制剂共同处理组(AG490+IL-27),然后用Transwell和细胞管腔成型实验检测IL-27对原代HUVECs血管成形能力的影响。结果:(1)IL-27及其受体WSX-1的蛋白水平在子痫前期胎盘组织中高于正常足月胎盘;(2)成功在体外建立培养原代人脐静脉内皮细胞的模型;(3)人重组IL-27(50 ng/m L)刺激HUVECs细胞后可以激活JAK2/STAT1信号通路;(4)与相应对照组相比,IL-27组、DMSO+IL-27组的迁移和血管成形能力降低。但是AG490+IL-27组与AG490组相比,并无明显变化。结论:IL-27可能通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R714.244
【部分图文】：

图 1 IL-27 刺激 HTR-8/SVneo 细胞后对其增殖和凋亡的影响Fig. 1 IL-27 had no significantly effect on apoptosis and proliferation in HTR-8/SVneo cells.A：使用流式细胞仪检测 IL-27 对 HTR-8/SVneo 细胞凋亡的影响；B：两组凋亡率的统计分析；C：EdU 增殖实验检测 IL-27 对 HTR-8/SVneo 细胞增殖的影响；D：EdU 增殖实验结果的统计分析；E：CCK-8 实验检测 IL-27 对 HTR-8/SVneo 细胞增殖的影响。(A) The effects of IL-27 on apoptosis rates in HTR-8/SVneo cells, assessed by flow cytometryRepresentative pictures of flow cytometry for apoptosis rate. (B) Bar graph shows the apoptosis ratecompared to the control group. (C) EdU incorporation assay showed no significant difference in celproliferation between IL-27 group and control group. The blue color indicates the nuclei and the redcolor represents EdU-positive nuclei. (D) Percentage of EdU-positive cells in each group. (E) TheOD value of each group was detected by CCK-8.All experiments were repeated three times.

重庆医科大学硕士研究生学位论文2.2 IL-27 可以抑制绒毛外植体的生长以及 HTR-8/SVneo 细胞的侵袭和迁移为了观察 IL-27 对滋养细胞能动性的影响，进行了绒毛外植体实验。滋养细胞外生性生长的距离反映了其迁移的能力。外植体培养 72 h 后，IL-27 处理组的外植体绒毛外滋养细胞的外生性生长的距离要短于对照组(图 2A, B)。为了进一步明确IL-27 对滋养细胞侵袭和迁移的影响，我们进行了 Transwell 和划痕实验。结果表明 IL-27 可以明显抑制滋养细胞株 HTR-8/SVneo 的侵袭和迁移能力（Figure 2C,F）。

24图 3 IL-27 对 HTR-8/SVneo 细胞和外植体绒毛外滋养细胞的 EMT 标志物表达的影响Fig. 3 The effects of IL-27 on EMT markers in HTR8/SVneo cells and extravillous explants.A-B：Western blotting 检测 IL-27 对 HTR-8/SVneo 细胞的 EMT 标志物表达的影响；C：免疫荧光检测 IL-27 处理 HTR-8/SVneo 细胞 24 h 后其 EMT 标志物表达的变化。D：免疫荧光检测 IL-27 处理外植体 72 h 后 EVTs 的 EMT 标志物表达的变化。* P < 0.05; ** P < 0.01。(A and B) HTR8/SVneo cells were treated with or without IL-27 for 24 h and subjected t
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本文编号：2883703