妊娠期糖尿病靶标筛选及分子机制研究

发布时间：2021-01-11 16:25

　　妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus,GDM）,是指妊娠过程中,由于拮抗胰岛素物质增加,胰岛素分泌受限的孕妇不能代偿生理变化而发生不同程度的糖耐量受损或者血糖升高。GDM是一种最常见的妊娠并发症之一,严重威胁着孕妇和后代的身体健康。对母亲的影响包括:围产期羊水过多及微血管病变,脏器功能受损,后期发生Ⅱ型糖尿病、肥胖等代谢综合征的风险增加;对胎儿的影响包括导致巨大儿、胎儿生长受限、胎儿窘迫、甚至胎死宫内,后期易发生代谢紊乱疾病等。目前,关于GDM发病机制还未完全阐明。因此,建立稳定的妊娠期糖尿病实验动物模型,联合临床病例,深入研究GDM病理机制,寻找灵敏、可靠的生化指标,对GDM孕妇进行早期的排查和制定有效的干预及治疗措施,并对高危GDM孕妇进行早期干预,具有重要的临床及保健意义。本论文的研究内容如下:（1）建立两种GDM动物模型进行分子靶点的筛选。首先,在妊娠前的雌性小鼠经过长期高脂饲料喂养（High-fat-diet,HFD）,HFD喂养小鼠出现不同程度的代谢紊乱及不同程度生殖功能不全;其次,建立仅在妊娠期进行HFD喂养的动物模型,HFD喂养的孕鼠... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)广东省

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究背景
    1.2 GDM发病机制的研究
        1.2.1 胰岛素抵抗与GDM发病机制的研究
        1.2.2 胰岛β细胞功能不全与GDM发病机制研究
    1.3 脂肪因子与GDM
    1.4 chemerin及其受体介绍
    1.5 骨骼与糖代谢
    1.6 OPG介绍
        1.6.1 OPG与糖代谢
        1.6.2 OPG与心血管相关研究
        1.6.3 OPG与妊娠综合征
    1.7 小结
第2章 GDM动物模型选择和分子靶标的筛选
    2.1 实验材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 动物实验
        2.1.3 腹腔注射葡萄糖耐量实验步骤
        2.1.4 腹腔注射胰岛素耐量实验步骤
        2.1.5 小鼠动情周期检测
        2.1.6 ELISA检测胰岛素实验步骤
        2.1.7 ELISA检测小鼠血清chemerin实验步骤
        2.1.8 ELISA检测小鼠血清OPG实验步骤
        2.1.9 血清激素和生化指标检测
        2.1.10 基因microarray分析
        2.1.11 RNA提取及实时荧光定量PCR
        2.1.12 组织石蜡包埋与切片
        2.1.13 免疫组织化学实验（IHC）
        2.1.14 统计分析
    2.2 实验结果
        2.2.1 雌性小鼠生长发育过程中长期高脂饮食喂养对代谢稳态的影响
        2.2.2 长期高脂饮食喂养对雌性小鼠生理周期影响
        2.2.3 长期高脂饮食喂养引起雌性小鼠白色脂肪组织基因差异性表达
        2.2.4 长期高脂饮食喂养引起雌性小鼠白色脂肪组织中基因富集基因
        2.2.5 妊娠过程HFD喂养对孕鼠代谢稳态的影响
        2.2.6 chemerin/GPR1信号系统研究靶点筛选
        2.2.7 骨保护素（OPG）研究靶点筛选
    2.3 小结
第3章 GPR1在妊娠期糖尿病发生发展和滋养层细胞增殖中作用机制的研究
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 临床样本收集
        3.1.3 GPR1动物干预实验
        3.1.4 腹腔注射葡萄糖耐量试验（IPGTT）方法
        3.1.5 腹腔注射胰岛素耐量试验（IPITT）方法
        3.1.6 饥饿血糖检测
        3.1.7 组织形态学实验步骤（HE）
        3.1.8 免疫组织化学
        3.1.9 血清甘油三酯（TG）检测步骤
        3.1.10 细胞培养稳准细胞构建
        3.1.11 细胞瞬间转染实验步骤
        3.1.12 蛋白提取及浓度检测实验步骤
        3.1.13 Western blotting（蛋白免疫印迹）实验步骤
        3.1.14 实时荧光定量PCR
        3.1.15 免疫细胞荧光步骤
        3.1.16 胎盘TG检测
        3.1.17 组织油红O染色实验步骤
        3.1.18 细胞脂滴积累实验
        3.1.19 细胞增殖实验步骤
        3.1.20 细胞侵袭实验步骤
        3.1.21 动物荷瘤实验
        3.1.22 统计
    3.2 结果
        3.2.1 chemerin及其受体在GDM病人胎盘中表达
        3.2.2 chemerin/GPR1系统在孕鼠中表达上调
        3.2.3 降低GPR1表达对妊娠小鼠血糖代谢影响
        3.2.4 GPR1对妊娠期胰岛功能的影响
        3.2.5 小鼠胎盘中GPR1敲低效率验证
        3.2.6 GPR1对胎盘中GLUT3表达影响
        3.2.7 GPR1对胎盘中脂质代谢影响
        3.2.8 GPR1促进滋养层细胞中GLU3和脂质积累
        3.2.9 GPR1通过pAKT/AKT信号通路调控滋养细胞的糖脂稳态
        3.2.10 GPR1在滋养层细胞中表达水平
        3.2.11 GPR1对pERK/ERK和pAkt/Akt信号通路影响
        3.2.12 GPR1对绒毛膜癌细胞侵袭和增殖功能的影响
        3.2.13 GPR1调控绒毛膜癌细胞侵袭和增殖功能的机制
        3.2.14 GPR1敲低可以抑制绒毛膜癌肿瘤生长
        3.2.15 一种GPR1特异性结合肽,LRH7-G3筛选
        3.2.16 LRH7-G3可以抑制绒毛膜癌肿瘤生长
    3.3 小结
        3.3.1 GPR1能够影响妊娠期高脂饮食喂养的小鼠的血糖
        3.3.2 代谢相关的靶点GPR1能够参与调控绒癌的发生
第4章 OPG在妊娠期糖尿病发生发展中作用
    4.1 实验材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 慢病毒包装及检测实验
        4.1.3 孕鼠和假孕鼠实验
        4.1.4 囊胚体外慢病毒感染及移植实验
        4.1.5 糖代谢检测
        4.1.6 免疫荧光
        4.1.7 蛋白免疫印迹
        4.1.8 实时荧光定量PCR
        4.1.9 胰岛细胞分离实验步骤
        4.1.10 葡萄刺激胰岛素分泌实验步骤（GSIS）
        4.1.11 胰岛素检测
        4.1.12 血清和组织匀浆OPG检测
        4.1.13 统计分析
    4.2 结果
        4.2.1 OPG在GDM病人中表达上调
        4.2.2 OPG在妊娠期小鼠中表达情况
        4.2.3 小鼠胎盘特异性OPG过表达
        4.2.4 胎盘特异性OPG能够促进HFD诱导GDM小鼠代谢稳态
        4.2.5 胎盘特异性OPG能够促进HFD诱导GDM小鼠β细胞增殖
    4.3 小结
第5章 讨论及展望
    5.1 GDM模型的选择和建立
    5.2 GDM潜在分子靶点研究
    5.3 研究工作的创新性
    5.4 下一步工作计划
参考文献
附录
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：2971103