RBMS3在HPV16相关宫颈鳞癌发生中的作用

发布时间：2017-04-24 15:09

  本文关键词：RBMS3在HPV16相关宫颈鳞癌发生中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)感染在宫颈癌发生中具有重要作用,其早期基因E7的持续表达是其致癌的关键,E7蛋白可通过多种途径诱导细胞异常增殖。抑癌基因RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RNA binding motif, single-stranded-interacting protein 3, RBMS3)在正常组织广泛表达,而在癌细胞系和原发性肿瘤中表达显著降低。本课题组经Agilent人基因表达谱芯片分析,发现沉默E7表达后,RBMS3表达上调。目的以HPV16 E7表达阳性的宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)组织、宫颈鳞状上皮组织、宫颈癌细胞株(宫颈癌SiHa细胞)以及HPV16E7表达阴性的宫颈鳞癌组织、CIN组织、宫颈鳞状上皮组织、宫颈癌细胞株(宫颈癌C33-A细胞)为研究对象,探讨HPV16相关宫颈癌发生中RBMS3的表达及作用,以期为进一步研究HPV16相关宫颈癌防治方法提供科学依据。方法1.通过Western blotting方法检测王RBMS3在HPV16 E7表达阳性的宫颈癌SiHa细胞和HPV16 E7表达阴性的宫颈癌C33-A细胞中的表达。2.通过免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色方法检测IBMS3在HPV16 E7表达阳性的宫颈鳞状上皮组织、C1N组织、宫颈鳞癌组织和HPV16E7表达阴性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织、宫颈鳞癌组织中的表达,并分析二者表达的关系。3.常规培养宫颈癌C33-A细胞,提取细胞总RNA并定量,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法扩增RBMS3基因编码序列(coding sequence, CDS),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-RBMS3并鉴定,经脂质体介导将pcDNA3.1-RBMS3重组质粒转染HPV16 E7表达阳性的宫颈癌SiHa细胞,通过生长曲线、克隆形成率、Annexin V-FIT C/PI结合流式细胞术等方法观察稳定表达RBMS3对SiHa细胞增殖和凋亡的影响。结果1. Western blotting结果显示：①GPV16 E7在宫颈癌C33-A细胞中不表达,而HPV16 E7在宫颈癌SiHa细胞中表达。②C33-A细胞中RBMS3的表达显著高于SiHa细胞(P0.01)。2.IHC结果显示：RBMS3在HPV16E7表达阳性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织和宫颈鳞癌组织中的表达均分别显著低于其在HPV16 E7表达阴性的宫颈鳞状上皮组织、C1N组织和宫颈鳞癌组织癌组织中的表达,二者表达呈负相关(P0.01)3.①细胞生长曲线和倍增时间计算结果显示：SiHa-RBMS3细胞的生长速度较SiHa-vect细胞的生长速度显著减慢(P0.01),倍增时间显著延长(P0.01)。②平板克隆形成实验结果显示：SiHa-RBMS3细胞的克隆形成均数显著低于SiHa-vect细胞的克隆形成均数(P0.01),克隆体积也较小。③Annexin V-FITC/PI结合流式细胞术结果显示：SiHa-RBMS3细胞凋亡均数明显高于SiHa-vectt细胞(P0.01),SiHa-RBMS3细胞SiHa-vect细胞凋亡细胞百分比分别为：11.543%和0.267%。结论1.E7和RBMS3在HPV16 E7表达阳性和阴性的宫颈癌细胞株和不同病变阶段宫颈组织中的表达呈负相关关系。2. RBMS3稳定表达对HPV16 E7表达阳性的宫颈癌SiHa细胞的增殖能力具有抑制作用,对其凋亡具有促进作用。
【关键词】：宫颈鳞癌 人乳头瘤病毒 RNA结合基序单链相互作用蛋白3基因 增殖 凋亡
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 HPV16 E7与RBMS3表达的关系12-32
• 1 材料与方法12-21
• 2 结果21-32
• 第二部分 RBMS3稳定表达对SiHa细胞增殖和凋亡能力的影响32-47
• 1 材料与方法32-41
• 2 结果41-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-54
• 综述：RNA结合基序单链相互作用蛋白RBMS3的研究进展54-62
• 参考文献59-62
• 附录 英文缩略词62-64
• 攻读学位期间发表文章情况64-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

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