卵巢透明细胞癌PIK3CA基因突变与扩增研究

发布时间：2017-04-30 20:21

  本文关键词：卵巢透明细胞癌PIK3CA基因突变与扩增研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨卵巢透明细胞癌中PIK3CA基因的突变与扩增情况。 方法：应用DNA测序和实时荧光定量PCR技术分析了51例卵巢透明细胞癌患者DNA，检测PIK3CA基因外显子9和外显子20的突变与扩增情况；对于新发现的PIK3CA突变，通过在细胞内表达外源性突变基因并检测细胞内Akt磷酸化水平，分析该突变的生物学意义。 结果：共发现9（9/51）例患者有PIK3CA基因的错义突变，其中6例为外显子9E545A突变，2例为外显子20H1047R突变，，另一例突变为新发现的外显子9T544P突变，该突变可导致细胞Akt磷酸化水平增加；在6（6/51）例卵巢透明细胞癌中检测出了PIK3CA基因的扩增阳性，但PIK3CA基因的突变与扩增之间无相关性。 结论：在卵巢透明细胞癌中PIK3CA基因突变和扩增的频率相对较低；PIK3CA基因的变异可能在卵巢透明细胞癌的一些亚型发挥作用。
【关键词】：卵巢透明细胞癌 PIK3CA基因 突变 扩增
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31;R440
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-10
• 1 实验材料与方法10-23
• 1.1 实验材料10-13
• 1.1.1 肿瘤标本、细胞株及试剂10-11
• 1.1.2 主要实验设备及仪器11
• 1.1.3 常用试剂的配制11-12
• 1.1.4 培养基配制12-13
• 1.2 实验方法13-23
• 1.2.1 石蜡切片中提取 DNA13-14
• 1.2.2 扩增外显子 9 和 2014
• 1.2.3 PCR 产物纯化及测序14-15
• 1.2.4 突变型 PIK3CA 质粒的构建15-18
• 1.2.5 细胞转染18
• 1.2.6 Western Blot18-21
• 1.2.7 PIK3CA 扩增水平的检测21-22
• 1.2.8 统计学处理22-23
• 2 实验结果23-30
• 2.1 病例基本资料23-24
• 2.2 OCCC 和正常卵巢组织病理切片24-25
• 2.3 OCCC 中 PIK3CA 基因突变分析25-27
• 2.4 定点突变载体构建结果27-28
• 2.5 野生型和突变型 PIK3CA 基因对细胞 Akt 磷酸化的影响28-29
• 2.6 OCCC 中 PIK3CA 基因扩增水平分析29-30
• 3 讨论30-32
• 参考文献32-36
• 致谢36-37
• 综述37-49
• 参考文献44-49
• 附录 1 攻读硕士学位期间发表的论文49-50
• 附录 2 攻读硕士学位期间参加的科研项目50

【参考文献】

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本文编号：337521