RNA干扰CXCR4和CXCR7对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响

发布时间：2017-05-08 15:11

  本文关键词：RNA干扰CXCR4和CXCR7对子宫内膜癌细胞生物学功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究通过利用si RNA(small interference RNA)沉默趋化因子受体CXCR4和CXCR7基因的表达,探讨其对子宫内膜癌细胞株生物学功能的影响。方法:①通过半定量RT-PCR及western blotting检测人子宫内膜癌细胞株中趋化因子受体CXCR4/CXCR7及其配体CXCL12的表达;②针对人CXCR4和CXCR7基因设计合成靶向特异性si RNA(小分子干扰RNA),利用LipofectamineTM2000脂质体转染剂瞬时转染至人子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1-A细胞株,应用RT-PCR及western blotting验证干扰效果;③通过CCK-8、流式细胞术和Transwell法分别检测CXCR4和CXCR7基因沉默对Ishikawa和HEC-1-A增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果:①Ishikawa和HEC-1-A细胞株均见CXCR4、CXCR7和CXCL12 m RNA和蛋白的表达;②将研究合成的CXCR4-si RNA、CXCR7-si RNA及CXCR4-si RNA/CXCR7-si RNA转染至Ishikawa和HEC-1-A细胞株后,均可分别并成功干扰CXCR4、CXCR7、CXCR4/CXCR7基因或蛋白的表达,通过半定量RT-PCR和western blotting检测分析发现干扰后细胞m RNA和蛋白的表达量明显下调;③在CCK-8、Transwell及流式细胞术实验中,CXCR4和CXCR7的单独沉默和联合沉默均可导致Ishikawa和HEC-1-A细胞株增殖能力和趋化侵袭能力明显降低,同时引发Ishikawa和HEC-1-A细胞周期出现S期阻滞。结论:通过应用si RNA靶向沉默CXCR4和CXCR7后,子宫内膜癌细胞株Ishikawa和HEC-1-A的增殖和侵袭能力均降低,并在细胞周期中出现S期阻滞。结果提示趋化因子受体CXCR4和CXCR7在Ishikawa和HEC-1-A细胞的增殖和侵袭行为中发挥重要作用,CXCR4和CXCR7途径的抑制有望成为子宫内膜癌治疗的新靶点。
【关键词】：子宫内膜癌 CXCR4 CXCR7 CXCL12 基因沉默
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-7
• 第一章 趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7在子宫内膜癌细胞系的表达7-20
• 1.1 实验材料7-9
• 1.1.1 主要实验试剂及材料7
• 1.1.2 研究对象7-9
• 1.2 实验方法与步骤9-15
• 1.3 统计学方法15
• 1.4 实验结果15-18
• 1.5 讨论18-20
• 第二章 应用si RNA下调子宫内膜癌细胞系CXCR4和CXCR7的表达20-31
• 2.1 实验材料20-21
• 2.2 实验方法与步骤21-22
• 2.3 统计学处理22
• 2.4 实验结果22-29
• 2.5 讨论29-31
• 第三章 si RNA沉默CXCR4和CXCR7后对子宫内膜癌细胞系生物学功能的影响31-42
• 3.1 实验材料31-32
• 3.2 实验方法与步骤32-33
• 3.3 统计学处理33
• 3.4 实验结果33-40
• 3.5 讨论40-42
• 第四章 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述46-60
• 综述的参考文献56-60
• 攻读学位期间的研究成果60-61
• 附录61-62
• 致谢62-63

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