卵巢癌外周血循环肿瘤细胞检测及分子表型分析

发布时间：2017-05-13 22:08

  本文关键词：卵巢癌外周血循环肿瘤细胞检测及分子表型分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分卵巢癌免疫磁珠的合成及表征目的制备靶向卵巢癌循环肿瘤细胞的免疫磁珠并对免疫磁珠的活性进行表征。方法：采用EDC/NHS活化羧基磁珠,活化的羧基末端通过EDC与抗体分子上的氨基相交联,NHS稳定合成的免疫磁珠。EPCAM为上皮细胞胞膜表面特异分子,为共有细胞表面标志物。MUC16为卵巢癌细胞膜表面特异分子,是卵巢癌组织特异细胞表面标志物。羧基磁珠活化后将EPCAM/MUC16抗体偶联在磁珠表面制备卵巢癌特异的免疫磁珠。通过IF及FCM方法对合成的免疫磁珠分散性及免疫活性进行鉴定。结果：通过用抗单克隆抗体Fc段的荧光二抗对免疫磁珠进行流式分析,显示EPCAM、MUC 16两种抗体与磁珠结合后表达率分别为：94.17±1.05%、97.80±0.60%,免疫荧光分析示磁珠与抗体结合后分散性良好。结论：实验成功制备出卵巢癌特异性EPCAM/MUC16免疫磁珠,免疫磁珠分散均匀,抗体活性高,提示免疫磁珠具有较高活性结合目的细胞。第二部分卵巢癌CTCs模型建立与免疫磁珠检测目的探讨EPCAM/MUC16免疫磁珠富集卵巢癌外周血中循环肿瘤细胞的灵敏度与特异性。方法培养卵巢癌SKOV3细胞,流式分析SKOV3细胞表面EPCAM/MUC16表达率。将20/50/100个SKOV3细胞加入4m1健康志愿者外周血中制备循环肿瘤细胞模型,分别用EPCAM免疫磁珠,MUC16免疫磁珠,EPCAM/MUC16免疫磁珠对循环肿瘤细胞模型进行富集与鉴定。结果EPCAM/MUC16在SKOV3细胞株中的表达率分别为99.41%,99.99%。EPCAM、MUC16单独与共同的检测限值均为每4ml血液中有50个SKOV3细胞,但能稳定检出细胞的界限值为每4ml血液中有100个SKOV3细胞,三组结果统计无差异(P0.05)。免疫磁珠不与外周血白细胞相结合,仅与部分细胞膜碎片相结合。结论EPCAM/MUC16免疫磁珠对卵巢癌循环肿瘤细胞具有较高的灵敏度与特异性。第三部分卵巢癌循环肿瘤细胞分子表型分析目的探讨卵巢癌循环肿瘤细胞中EPCAM,MUC16分子的表达情况方法将采集的30例Ⅲ期上皮性卵巢癌12ml外周血样本,每例均分为4m1样本,同时使用EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、混合磁珠(两种磁珠1：1混合)进行检测,三种检测方法所使用磁珠总量相同。免疫磁珠富集的细胞HE染色后鉴定检测值。结果EPCAM、MUC16单独检测CTCs与共同检测CTCs的检测值分别为22±11、14±6、28±12(P0.05)。通过对免疫磁珠富集出的CTCs进行HE染色显示免疫磁珠围绕吸附CTCs。结论通过EPCAM、MUC16免疫磁珠单独与共同应用检测CTCs模型与病人血样本,结果显示在敏感性检测中,其无统计学差异,但在患者外周血中有统计学差异,推测外周血中EPCAM、MUC16表达比率较培养的SKOV3稳定细胞株发生变化。EPCAM免疫磁珠在患者外周血中瘤细胞检出率大于MUC16免疫磁珠检测值,说明在外周血循环肿瘤细胞中EPCAM表达率高于MUC 16,而两者混合免疫磁珠检测值高于单独使用EPCAM作为免疫磁珠检测,推测外周血中部分不表达EPCAM的CTCs表达MUC16,MUC16与EPCAM独立表达。
【关键词】：免疫磁珠 SKOV3细胞 循环肿瘤细胞 EPCAM MUC16 免疫磁珠 EPCAM MUC16 免疫磁珠 卵巢癌 循环肿瘤细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 第一部分 卵巢癌免疫磁珠的合成及表征15-18
• 1 材料与方法15-16
• 2 结果16-17
• 3 讨论17-18
• 第二部分 卵巢癌CTCs模型建立与免疫磁珠检测18-23
• 1 材料与方法18-20
• 2 结果20-21
• 3 讨论21-23
• 第三部分 卵巢癌循环肿瘤细胞分子表型分析23-26
• 1 材料与方法23
• 2 结果23-24
• 3 讨论24-26
• 全文总结26-28
• 参考文献28-31
• 附图31-35
• 文献综述35-42
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 攻读硕士期间发表的论文43

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本文编号：363741