热疗对宫颈癌细胞cGAS表达的影响及作用机制

发布时间：2022-08-12 15:55

　　热疗是与先天免疫和适应性免疫反应调节相关的医学手段,可以刺激稳态趋化因子、整联蛋白、黏附因子以及细胞因子IFN-γ、IL-2等的表达。在对宫颈癌的治疗中增加热疗也会刺激细胞因子的分泌,诱导强烈的全身性抗HPV免疫反应,但人们目前对热疗促进细胞因子表达的机制的了解还有不足。cGAS是近年来发现的一种胞质DNA识别分子,感受到胞质中的异常DNA后会激活细胞的cGAS-STING通路,产生I型IFN反应,是细胞先天免疫的重要组成部分。HPV作为双链DNA病毒,感染细胞后会被细胞内及细胞间的多种免疫机制清除。相应地,HPV也进化出多重机制逃避宿主的免疫反应,完成持续感染的病毒便是在一定程度上逃避了先天免疫反应和适应性免疫反应的作用。为探究热疗对cGAS表达的影响,本研究选取HPV18阳性宫颈癌细胞He La和HPV16阳性宫颈癌细胞Si Ha为研究对象,建立了加热处理细胞的模型,用以研究宫颈癌细胞对热疗的短期应答和循环热处理后的细胞反应。通过q RT-PCR检测42℃加热培养后宫颈癌细胞内cGAS的转录水平,同时检测另一核酸识别分子RIG-1的表达。结果显示42℃培养60 min后cGAS的m... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 课题背景及研究的目的意义
    1.2 HPV的致癌机制
        1.2.1 癌蛋白E6和E7的关键作用
        1.2.2 免疫逃逸
        1.2.3 HPV对细胞表观遗传的影响
    1.3 热疗
        1.3.1 热疗的简介
        1.3.2 热疗在肿瘤治疗中的应用
        1.3.3 热疗的作用机制
        1.3.4 热疗对宫颈癌治疗的作用
    1.4 主要研究内容
    1.5 实验技术路线
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系、菌株及质粒
        2.1.2 实验所用引物
    2.2 实验主试剂与仪器
        2.2.1 实验所需试剂及耗材
        2.2.2 实验相关试剂配方
        2.2.3 主要实验仪器及生物学分析软件
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 RNA水平的检测
        2.3.3 蛋白表达及纯化
第3章 热处理对cGAS表达的影响
    3.1 引言
    3.2 宫颈癌细胞热处理模型的确立
    3.3 42℃培养对宫颈癌细胞cGAS和 RIG-1 转录水平的影响
        3.3.1 42℃培养对宫颈癌细胞cGAS转录水平的影响
        3.3.2 42℃培养对宫颈癌细胞RIG-1转录水平的影响
    3.4 42℃培养对C关键癌蛋白E6和E7 转录水平的影响
        3.4.1 42℃培养对hrHPV癌基因E6 转录水平的影响
        3.4.2 42℃培养对hrHPV癌基因E7 转录水平的影响
    3.5 IPTG诱导重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中表达
    3.6 讨论
    3.7 本章小结
第4章 热处理对表观遗传修饰的调节
    4.1 引言
    4.2 42℃培养对宫颈癌细胞EP300转录水平的影响
    4.3 42℃培养对宫颈癌细胞GCN5转录水平的影响
    4.4 cGAS甲基化分析
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
结论
展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国宫颈癌防治任重而道远[J]. 乔友林.  中华肿瘤杂志. 2018 (10)



本文编号：3676167