PPARγ在细菌脂多糖下调胎盘滋养细胞11β-HSD2中的作用及其机制

发布时间：2022-10-22 18:31

　　细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性细菌的主要毒性成分。已有研究表明,多种妊娠不良结局常和孕期LPS暴露相关,孕晚期母体LPS暴露可以导致胎儿宫内受限（intrauterine growth restriction,IUGR）。IUGR是指胎儿未能达到其遗传决定的生长潜能,临床上指出生体重低于同孕龄同性别平均出生体重第10个百分位数或两个标准差。IUGR不仅是造成围产期胎儿高发病率和死亡率的主要原因,而且也增加了多种成年期慢性疾病的发生风险。目前,IUGR在中国以及全世界范围内发生率一直居高不下,但是LPS暴露是如何导致胎儿生长受限的机制仍不清楚。研究发现,孕期母体糖皮质激素（glucocorticoid,GC）的过量暴露不仅可以导致IUGR,而且导致了成年后多种慢性病的发生。在动物体内,皮质酮是其中最重要的糖皮质激素;而在人类中,糖皮质激素以皮质醇为主。GC在维持正常妊娠中发挥着重要的作用,同时对于胎儿的正常发育和分娩也是极其重要的。因此,控制胎儿循环中合适的GC水平对于营造安全的宫内发育环境是必不可少的。Ⅱ型11β-羟基固醇脱氢酶（11β-hydr... 

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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1.前言
2.材料和方法
    2.1 主要试剂和来源
    2.2 主要药品和试剂配制
    2.3 主要仪器
    2.4 实验方案
        2.4.1 LPS暴露对小鼠胎盘和人胎盘滋养细胞11β-HSD2 表达的影响
        2.4.2 PPARγ激动剂上调人胎盘滋养细胞11β-HSD2 表达
        2.4.3 LPS暴露对小鼠胎盘PPARγ及其靶基因的影响
        2.4.4 LPS暴露对人胎盘滋养细胞PPARγ核转位的影响
        2.4.5 LPS暴露对小鼠胎盘以及人胎盘滋养细胞NF-κB信号的影响
        2.4.6 LPS以 NF-κB依赖的方式抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
        2.4.7 LPS增强人胎盘滋养细胞中NF-κB p65和PPARγ相互作用
        2.4.8 LPS介导的胎盘11β-HSD2 下调与胎儿生长受限的关联的病例对照研究
    2.5 主要实验方法和技术
        2.5.1 胎盘m RNA提取与RT-PCR
        2.5.2 胎盘总蛋白的提取与蛋白浓度的测定
        2.5.3 胎盘核蛋白的提取与蛋白浓度的测定
        2.5.4 细胞胞浆蛋白和核蛋白的提取与蛋白浓度的测定
        2.5.5 蛋白免疫印迹(Western blotting)
        2.5.6 免疫组织化学检测(Immunohistochemistry,IHC)
        2.5.7 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)
        2.5.8 小干扰RNA( Small interfering RNA,siRNA)
        2.5.9 细胞免疫荧光(Immunofluorescence,IF)
    2.6 统计分析
3.结果
    3.1 LPS暴露下调小鼠胎盘以及人胎盘滋养细胞11β-HSD2 表达.
        3.1.1 LPS暴露下调小鼠胎盘11β-HSD2 表达
        3.1.2 LPS暴露下调人胎盘滋养细胞11β-HSD2 表达
    3.2 PPARγ激动剂上调人胎盘滋养细胞11β-HSD2 表达
        3.2.1 RSG激活人胎盘滋养细胞PPARγ并上调11β-HSD2 表达
        3.2.2 PPARγ抑制剂对抗RSG上调人胎盘滋养细胞11β-HSD
    3.3 LPS暴露抑制小鼠胎盘PPARγ及其靶基因的表达
        3.3.1 孕期LPS暴露抑制小鼠胎盘PPARγ核转位及其靶基因
        3.3.2 孕期LPS暴露抑制RSG激活小鼠胎盘PPARγ核转位
    3.4 LPS暴露抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
        3.4.1 LPS暴露抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
        3.4.2 LPS暴露抑制RSG诱导人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
    3.5 LPS暴露激活小鼠胎盘和人胎盘滋养细胞NF-κB信号
        3.5.1 孕期LPS暴露激活小鼠胎盘NF-κB信号
        3.5.2 LPS暴露激活人胎盘滋养细胞NF-κB信号
    3.6 LPS暴露通过NF-κB p65 抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
        3.6.1 阻断NF-κBp65 减轻LPS抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位
        3.6.2 沉默NF-κBp65 减弱LPS抑制人胎盘滋养细胞PPARγ核转位和11β-HSD2 表达
    3.7 人胎盘滋养细胞NF-κB p65和PPARγ之间的相互作用
        3.7.1 人胎盘滋养细胞NF-κB p65和PPARγ在胞浆之间的相互作用
        3.7.2 人胎盘滋养细胞NF-κB p65和PPARγ在胞核之间的相互作用
        3.7.3 人胎盘滋养细胞NF-κB p65和PPARγ之间的共定位
    3.8 AGA和 SGA胎盘上11β-HSD2,PPARγ以及NF-κB p65 的水平
    3.9 新生儿体重与胎盘11β-HSD2,PPARγ以及NF-κB p65 水平之间的相关性
4.讨论
5.结论
6.研究不足和下一步研究计划
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]胎儿宫内发育迟缓的病因[J]. 董彦亮.  中国实用妇科与产科杂志. 2002(01)



本文编号：3696641