SFMBT1通过Notch信号通路调控HeLa细胞增殖与迁移的作用研究

发布时间：2022-10-29 15:18

　　目的:在人类细胞中,SFMBT1蛋白是一种多数蛋白,含有4个重复的MBT结构,对细胞的转录沉默具有重要作用,可以与多种蛋白相互结合作用于DNA的转录抑制辅助因子。SFMBT1经由其转录抑制作用,在保持细胞干性、加快细胞生长、促进癌症细胞EMT及侵袭性方面有重要作用,可以促进细胞进展和转移,与肿瘤不良预后有关。本研究旨在探讨SFMBT1表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移的影响,以及Notch信号通路关键因子和下游靶基因表达水平的变化,探讨SFMBT1对HeLa细胞中Notch信号通路的作用。方法:构建含有SFMBT1基因的重组真核表达载体prvkm-SFMBT1,通过双酶切和基因测序鉴定;设计并合成SFMBT1的干扰RNA（siRNA）,同时设置空白对照组、prvkm-vector组及SFMBT1-siNC组。分别用prvkm-SFMBT1、prvkm-vector、siRNA-SFMBT1、SFMBT1-siNC转染HeLa细胞,48h后采用RT-qPCR和Western blot法检测SFMBT1 mRNA和蛋白的相对表达水平;通过MTT法在转染后0h、24h、48h、72h检测细胞... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第1章 前言
    1.1 研究意义
    1.2 NOTCH信号通路的研究现状
    1.3 SFMBT1蛋白研究现状
    1.4 本课题立项依据与研究目标
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验仪器与试剂
        2.2.1 实验仪器
        2.2.2 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 prvkm-SFMBT1、prvkm vector质粒扩增
        2.3.2 细胞培养与转染
        2.3.3 Western blot实验检测转染效率
        2.3.4 RT-qPCR实验检测转染效率
        2.3.5 MTT法检测SFMBT1对HeLa细胞增殖的影响
        2.3.6 划痕实验SFMBT1对HeLa细胞迁移的影响
        2.3.7 Western blot实验检测各组转染HeLa细胞后对Notch信号通路中相关靶基因蛋白的表达影响
        2.3.8 RT-qPCR实验检测各组转染HeLa细胞后对Notch信号通路中相关靶基因mRNA表达的影响
        2.3.9 ChIP实验检测SFMBT1与RBP-J相互作用
        2.3.10 免疫共沉淀实验检测SFMBT1与RBP-J相互作用
第3章 结果与讨论
    3.1 PRVKM-SFMBT1、PRVKM VECTOR质粒扩增
    3.2 细胞转染效率
    3.3 WESTERN BLOT实验检测转染效率
    3.4 RT-QPCR实验检测转染效率结果
    3.5 MTT法检测SFMBT1对HELA细胞增殖结果
    3.6 划痕实验SFMBT1对HELA细胞迁移结果
    3.7 SFMBT1 过表达和抑制对NOTCH信号通路中相关靶基因MRNA与蛋白的表达影响
    3.8 CHIP实验检测SFMBT1与RBP-J相互作用
    3.9 免疫共沉淀实验检测SFMBT1与RBP-J相互作用
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
致谢
参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-218靶向SFMBT1影响肺癌细胞凋亡的研究[J]. 冯永海,李宏云,余春华,吴拥军,张国俊.  现代肿瘤医学. 2018(15)
[2]miR-218负调控SFMBT1抑制肝癌细胞增殖[J]. 邓荣华,黄进团,谷欣.  临床和实验医学杂志. 2017(13)
[3]我国每死亡五人中就有一人死于癌症[J]. 卢文洁.  共产党员. 2011(23)

博士论文
[1]miR-218抑制宫颈癌细胞EMT、侵袭迁移及其机制研究[D]. 姜兆静.南方医科大学 2015



本文编号：3697929