人经血间充质干细胞对多囊卵巢综合征大鼠卵巢CYP19A1的影响

发布时间：2023-04-22 13:02

　　背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS),是一种生殖内分泌及代谢异常性疾病,是育龄妇女不孕的重要原因之一。雄激素升高是多囊卵巢综合征众多病理变化的重要形成原因,CYP19A1转录翻译的芳香化酶是催化雄激素转化为雌激素过程的限速酶。间充质干细胞目前被应用于多种疾病的治疗,其中经血间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)是新发现的一种,尚无应用于多囊卵巢综合征治疗的研究报告。目的:探讨经血间充质干细胞对多囊卵巢综合征大鼠卵巢CYP19A1基因表达的影响方法:随机选取60只6周雌性大鼠,40只注射胰岛素+绒毛膜促性腺激素,造模多囊卵巢综合征大鼠,20只设置为对照组。通过检测血清睾酮浓度及阴道脱落细胞变化,来观察大鼠发情周期变化。PCOS组取4只大鼠,对照组取2只大鼠,处死,取卵巢,一侧卵巢切片,用于观察病理变化,另一侧卵巢的一半用于RNA提取,另一半备提取蛋白,用以检测多囊卵巢造模成功情况。培养人经血间充质干细胞,对其细胞表面抗原分子采用流式细胞仪进行鉴定,并进行细胞...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1.引言
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 人经血间充质干细胞（MenSCs）
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验药品与试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 经血干细胞的培养、鉴定和分化
        2.2.2 PCOS大鼠模型的建立
        2.2.3 细胞慢病毒转染
        2.2.4 大鼠眼眶静脉取血
        2.2.5 石蜡包埋与石蜡切片
        2.2.6 石蜡切片HE染色
        2.2.7 石蜡切片免疫荧光染色
        2.2.8 大鼠阴道脱落细胞涂片
        2.2.9 大鼠经血间充质干细胞移植
        2.2.10 间充质干细胞在大鼠体内的定位
        2.2.11 大鼠卵巢RNA的提取
        2.2.12 RNA反转录
        2.2.13 实时荧光定量PCR
        2.2.14 统计分析
3.结果
    3.1 动物模型评价
        3.1.1 多囊卵巢综合征组大鼠的发情周期紊乱
        3.1.2 造模后大鼠血清雄激素浓度检测结果
    3.2 实验所用经血间充质干细胞鉴定
        3.2.1 经血间充质干细胞分化
        3.2.2 流式细胞仪鉴定经血间充质干细胞表面分子
    3.3 经血间充质干细胞移植后大鼠体内定位
        3.3.1 小动物成像系统，追踪荧光素酶体内位置
        3.3.2 荧光显微镜观察绿色荧光蛋白大鼠卵巢定位
    3.4 大鼠卵巢石蜡切片HE染色后病理观察
        3.4.1 治疗前PCOS大鼠与对照组大鼠卵巢病理切片差异
        3.4.2 PCOS组大鼠经血间充质干细胞治疗后与DMEM细胞培养基对照治疗后卵巢病理切片差异
    3.5 干细胞治疗后大鼠血清雄激素浓度的变化
    3.6 CYP19A1在大鼠卵巢中的表达
        3.6.1 PCOS-MSCs组与PCOS-DMEM组比较
        3.6.2 NC-DMEM组与PCOS-MenSCs组比较
        3.6.3 PCOS-MenSCs组与NC-MenSCs组比较
        3.6.4 PCOS-DMEM组与NC-DMEM组比较
4.讨论
    4.1 实验动物模型的选择
    4.2 经血间充质干细胞的鉴定
    4.3 大鼠尾静脉注射MenSCs移植
    4.4 经血间充质干细胞对CPY19A1在大鼠卵巢中表达的影响
5 结论与展望
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录或缩略词表
致谢



本文编号：3797689