机械法和胰酶法分离大鼠卵巢颗粒细胞的比较

发布时间：2023-05-12 21:51

　　目的探讨胰酶法分离大鼠卵巢颗粒细胞的优势。方法取3～4周龄雌性SD大鼠的卵巢,分别采用机械法和胰酶法分离颗粒细胞并进行培养。机械法:于40倍解剖显微镜下用针头刺破卵巢成熟的卵泡,将含有卵巢剩余组织及卵泡液的培养液用200目滤网过滤;胰酶法:用无菌眼科剪将卵巢剪成小于2 mm³的小碎块,然后加入0.25%胰酶,室温消化1 h后,将含有卵巢碎块的消化液用200目滤网过滤。比较这2种分离方法获得的细胞数量、细胞活力,及雌二醇和孕酮的分泌情况。结果机械法和胰酶法这2种方法分离的原代大鼠卵巢颗粒细胞存活率均>90%。将细胞培养1～9 d,除24 h外,其余各时间点胰酶法分离的细胞增殖率均高于机械法;胰酶法细胞增殖率峰值出现时间早于机械法24 h,并且胰酶法分离的细胞最大增殖率[72 h:(210.09±0.95)%]高于机械法[96 h:(180.50±0.74)%],差异有统计学意义(P<0.05)。胰酶法分离的细胞激素的最大分泌量、每日平均分泌量及分泌总量均高于机械法,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论胰酶法分离的大鼠卵巢颗粒细胞在细胞活力和激...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 实验药物、试剂与仪器
    1.3 卵巢颗粒细胞的分离与培养
        1.3.1 机械法
        1.3.2 胰酶法
    1.4 大鼠卵巢颗粒细胞的鉴定
        1.4.1 H-E染色观察颗粒细胞的形态
        1.4.2 免疫细胞化学染色观察颗粒细胞的FSHR表达
    1.5 CCK-8法检测大鼠卵巢颗粒细胞增殖活力
    1.6 ELISA法检测大鼠卵巢颗粒细胞激素分泌
    1.7 统计学处理
2 结 果
    2.1 大鼠卵巢颗粒细胞的鉴定
    2.2 2种方法分离的大鼠卵巢颗粒细胞的生长对比
    2.3 2种方法分离的大鼠卵巢颗粒细胞的激素分泌对比
3 讨 论



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