VVC患者临床分离白念珠菌锌簇转录因子Cap1、Mrr1对外排泵基因MDR1的作用

发布时间：2017-05-20 12:20

  本文关键词：VVC患者临床分离白念珠菌锌簇转录因子Cap1、Mrr1对外排泵基因MDR1的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal Candida,VVC)是一种临床上主要累及外阴部和阴道内的,一般是由念珠菌所感染机体导致的疾病,它的症状主要为生殖器部位的瘙痒,患者的白带增多表现为豆腐或凝乳状,日常生活中大约有75%的女性在一生中大约会罹患一次VVC。VVC在实际临床中一般容易治疗,但它有较高的发病率,同时治疗后数月或数年在女性身体免疫力低下时又会复发,所以,它对世界上各个国家和地区女性的身心健康构成了巨大的威胁。当前,各地区医院在临床上治疗VVC主要选用的药物大部分是唑类,首选氟康唑(FCA),由于VVC患者长期不合理的用药和患者自身免疫功能的低下等诸多原因导致了耐唑类药物菌株的出现,且耐药现象日趋严重。所以,目前对于研究VVC中白念珠菌对唑类药物的耐药非常紧迫,这一研究结果对于在临床上指导VVC的治疗具有重要意义。目的:1.了解当地VVC患者阴道分泌物中各种类型念珠菌的主要分布情况和所分离出来的菌株对常用唑类药物的敏感性;2.探讨在本地区VVC患者中白念珠菌中锌簇转录因子Cap1、Mrr1和外排泵基因MDR1的表达水平与临床上经常使用的药物氟康唑的耐药关系,同时分析三种因子之间有无协同耐药关系。方法:收集从2014年3月到2014年11月,山西医科大学第二医院皮肤性病科,疑似VVC患者的洁净阴道分泌物标本总共约256例,下一步通过KOH的显微镜的检查、沙氏培养基、API20CAUX阳性标本的鉴定系统,对所得临床标本进行真菌的直接镜检和培养,一共获得了158株念珠菌。运用ATB Fungus3酵母检测系统测量所分离出的念珠菌对常见5种唑类药物的敏感性。对上述在实验室最初将从白念珠菌分离鉴定出来的68株白念珠菌分别同时提取它们各自基因组的DNA,采用更为精确的分子生物学PCR方法来进一步检测以上菌株是否确定为白念珠菌。随机选取上述实验得到的白念珠菌50株,分别得到对FCA敏感的和对FCA耐药的25株。下一步主要是提取每个菌株的总RNA,进行严格的逆转录进而合成c DNA,FQ-RT-PCR方法得到Mrr1、Cap1、MDR1等基因的具体表达量,同时分析它们的表达水平与FCA的耐药关系。结果:1.一共收集了VVC患者洁净的阴道分泌物256份,真菌培养结果是阳性的总共有158例,阳性率为61.7%。其中白念珠菌具体是68株(43.0%),热带念珠菌具体是31株(19.6%),光滑念珠菌具体是22株(13.9%),近平滑念珠菌具体是8株(5.1%),克柔念珠菌具体是5株(3.2%),其它的菌主要是24株(15.2%)。2.对1中的68株各种方法鉴定后的白念珠菌药物的敏感性的结果为:白念珠菌对5-FC、AMB都很敏感,对ITR、FCA和VRC的耐药性分别为36.7%、38.71%和42.65%。存在共同耐药现象。3.检测各个基因的m RNA表达水平在白念珠菌耐FCA耐药菌株和敏感菌株中的Mrr1、Cap1、MDR1的表达量。白念珠菌的耐药组中的Cap1、MDR1分子的表达比敏感组(P0.05)的表达高得多,所得结果:在耐药组中Cap1基因的表达量为敏感组基因的表达量的5.12倍,耐药组Mrr1基因的表达量是敏感组基因的表达量的1.67倍,Cap1与MDR1呈明显的正相关,而Mrr1与MDR1没有统计学上表达的差异。结论:1.白念珠菌株仍为本地区VVC感染的主要致病真菌,对氟康唑敏感株较多,可作为临床治疗VVC一线用药。2.白念珠菌中Cap1与MDR1的m RNA表达量都较高,它们在在唑类药物耐药中发挥着巨大的的主要作用。3.MDR1的表达量增高可能使唑类药物产生耐药,Cap1的高表达可以直接导致唑类药物另一方面可通过调控外排泵基因MDR1的m RNA表达水平,使MDR1基因的m RNA表达水平有了很明显的上升,进而使它们发挥耐药。4.Mrr1的明表达水平在唑类中发挥不明显的耐药作用。
【关键词】：外阴阴道念珠菌病 白念珠菌 锌簇转录因子 外排泵基因 高表达
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.3
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 临床菌株分离、鉴定与药物敏感性分析16-29
• 1 实验材料16-18
• 1.1 菌株来源16
• 1.2 主要仪器16
• 1.3 主要试剂及来源16-17
• 1.4 主要试剂的制备17-18
• 2 实验方法18-22
• 2.1 真菌镜检18
• 2.2 真菌分离的培养及菌种鉴定18-19
• 2.3 药物的敏感性试验19-20
• 2.4 白念珠菌菌株DNA提取20-22
• 3 实验结果22-26
• 3.1 真菌镜检、培养结果22
• 3.2 CHROMagar显色培养基培养结果22-23
• 3.3 API 20C AUX酵母菌鉴定试剂条鉴定结果23
• 3.4 体外药敏试验结果23-25
• 3.5 真菌通用引物ITS4/ITS86的扩增结果25-26
• 4 讨论26-29
• 第二部分 白念珠菌锌簇转录因子及外排泵基因的表达与耐药的关系29-41
• 1 实验材料29-30
• 1.1 实验菌株29
• 1.2主要仪器29
• 1.3主要试剂29
• 1.4 主要试剂的制备29-30
• 2 实验方法30-34
• 2.1 菌株选择30
• 2.2 菌株RNA的提取30-31
• 2.3 逆转录（c DNA的合成）31
• 2.4引物的设计及合成31-32
• 2.5 实时荧光定量PCR反应（RT-PCR)及基因扩增32-34
• 3 实验结果34-38
• 3.1 RT-PCR反应的特异性扩增34-35
• 3.2 锌簇转录因子Cap1在耐药组与敏感组中m RNA表达水平35-36
• 3.3 锌簇转录因子Mrr1在耐药组与敏感组中m RNA的表达水平36
• 3.4 外排泵基因MDR1在耐药组与敏感组中m RNA的表达水平36
• 3.5 Cap1、Mrr1及外排泵MDR1基因m RNA表达量的相关性分析36-38
• 4 讨论38-40
• 5 结论40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-53
• 参考文献50-53
• 致谢53-54
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果54-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 孟晓红;郭红卫;;复发性念珠菌阴道炎患者念珠菌菌落计数及INF-γ、IL-4水平的检测[J];广东医学院学报;2012年04期

2 刘小平;樊尚荣;彭燕婷;张慧萍;;外阴阴道念珠菌病的念珠菌种类及抗真菌药物敏感性分析[J];中国全科医学;2015年07期

3 吴颖;刘伟;万哲;李若瑜;;氟康唑耐药的白念珠菌对唑类药物交叉耐药实验[J];中国皮肤性病学杂志;2009年03期

4 周秀梅;池鸿斐;陈丽玮;金秀花;;外阴阴道假丝酵母菌病临床特征和抗真菌药物敏感性研究[J];中国性科学;2013年05期

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本文编号：381613