YWHAE与HE4相互作用调控PI3K/AKT和MAPK信号通路影响卵巢癌恶性生物学行为及其机制研究

发布时间：2023-06-04 21:23

　　目的:女性生殖系统恶性肿瘤严重威胁女性生命健康,卵巢癌是其中死亡率最高恶性肿瘤。卵巢癌是一种很难早期发现和早期诊断的疾病,70%的患者确诊时已属晚期^[1]。目前虽然卵巢癌在治疗方面有了很大的提高,相关靶向药物已经应用于临床,但其5年生存率仍徘徊于25～45%^[2]。主要原因可能是卵巢有较高的复发率、较强的化疗耐药能力、免疫逃逸能力、较高的转移率等。因此卵巢癌的发生发展机制一直是妇科肿瘤基础与临床研究的重点,寻找高效、特异的肿瘤标记物及有效的药物作用靶点,对于卵巢癌的诊断及疾病进展监测十分重要。人附睾蛋白4(Human Epididymis Protein 4,HE4),最初在附睾上皮细胞中检测到其特异性表达于而得名^[3]。有研究者利用基因组分析比较,发现HE4在卵巢癌中高表达^[4],随后有研究者^[5]通对2607个项目进行Meta分析发现,HE4在卵巢癌的诊断和疾病进展监测中具有更高的敏感性和特异性,其阳性似然比、阴性似然比均优于CA125,且HE4在良性疾病中的阳性表达率低于...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :YWHAE与 HE4 为相互作用蛋白及其在卵巢组织中的表达及临床意义
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 标本来源
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 主要工作液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 Western Blot
            2.2.3 免疫共沉淀
            2.2.4 免疫荧光共聚焦
            2.2.5 免疫组织化学
            2.2.6 瞬转干扰YWHAE细胞系建立
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 免疫共沉淀检测YWHAE和 HE4 的互作关系
        3.2 免疫荧光共定位法检测YWHAE和 HE4 的表达及共定位
        3.3 Western Blot检测YWHAE和 HE4 的相互调节机制
        3.4 YWHAE在各组卵巢组织中的表达情况
        3.5 YWHAE的表达情况与卵巢癌临床病理参数的关系
        3.6 YWHAE表达情况与卵巢癌患者生存预后的关系
        3.7 YWHAE、HE4 蛋白在卵巢癌组织中表达具有明显相关性
    4 讨论
    5 结论
第二部分 YWHAE对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 细胞系
            7.1.2 裸鼠
            7.1.3 主要试剂
            7.1.4 主要仪器
            7.1.5 主要工作液的配制
        7.2 方法
            7.2.1 细胞培养
            7.2.2 稳转过表达YWHAE细胞系建立
            7.2.3 Western blot
            7.2.4 侵袭实验
            7.2.5 划痕试验
            7.2.6 MTT实验
            7.2.7 细胞周期实验
            7.2.8 细胞凋亡实验
            7.2.9 裸鼠成瘤实验
        7.3 统计学分析
    8 结果
        8.1 YWHAE在各种卵巢癌细胞中表达的情况
        8.2 建立YWHAE差异表达卵巢癌细胞系模型
        8.3 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞侵袭能力的影响
        8.4 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞迁移能力的影响
        8.5 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞上皮间质转化能力的影响
        8.6 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞增殖能力的影响
        8.7 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞周期的影响
        8.8 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞凋亡的影响
        8.9 差异表达YWHAE对卵巢癌细胞体内成瘤能力的影响
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :YWHAE影响上皮性卵巢癌细胞生物学行为的机制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 细胞系
            12.1.2 主要试剂
            12.1.3 主要仪器
            12.1.4 主要工作液的配制
        12.2 方法
            12.2.1 细胞培养
            12.2.2 Western blot
            12.2.3 细胞通路抑制剂添加实验
            12.2.4 细胞体外侵袭能力
            12.2.5 划痕试验检测细胞迁移能力
            12.2.6 MTT检测细胞增殖能力
        12.3 统计学分析
    13 结果
        13.1 数据库预测
        13.2 差异表达YWHAE前后PI3K、AKT、m-TOR及其磷酸化水平的表达变化
        13.3 差异表达YWHAE前后MEK、p-MEK、ERK、p-ERK的表达变化
        13.4 过表达YWHAE的卵巢癌细胞系中加入PI3K通路抑制剂及MAPK通路抑制剂对卵巢癌细胞生物学行为的改变
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3831041