hsa—miRNA27a和hsa—miRNA451通过调控MDR1/P—gp的表达和功能参与卵巢癌和乳腺癌细胞耐药

发布时间：2024-01-19 15:04

　　背景与目的:肿瘤细胞耐药是临床化疗失败的主要原因,微小RNA(microRNA,miRNA)在肿瘤细胞中的异常表达与耐药关系密切。本研究旨在探讨卵巢癌及乳腺癌细胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达差异及其与耐药的关系。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;颈环状引物实时定量聚合酶链反应(stem-loop quantitative real-time PCR,stem-loop RT-PCR)检测卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol和亲本细胞A2780以及乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM和亲本细胞MCF-7中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达;利用Lipofectamine^TM2000分别将成熟miRNA27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(negative control,NC)RNA转染A2780和A2780/Taxol细胞,将成熟miRNA451的模拟物及NC转染MCF-7/ADM细胞;RT-PCR技术检测细胞MDR1 mRNA表达;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 卵巢癌耐紫杉醇细胞株A2780/Taxol的建立
        1.2.3 颈环状引物实时定量聚合酶链反应(stem-loop quantitative real-time PCR,stemloop RT-PCR)检测肿瘤细胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451表达
        1.2.4 细胞转染
        1.2.5 RT-PCR技术检测细胞MDR1mRNA表达
        1.2.6 蛋白[质]印迹法(Western blot)检测细胞P-gp的表达
        1.2.7 MTT法检测细胞增殖情况
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 miRNA27a和miRNA451在卵巢癌和乳腺癌细胞中的表达
    2.2 卵巢癌和乳腺癌细胞中MDR1 mRNA的表达
        2.2.1 转染后卵巢癌A2780和A2780/Taxol细胞MDR1 mRNA表达
        2.2.2 转染前、后MCF-7/ADM细胞MDR1mRNA的表达
    2.3 卵巢癌细胞和乳腺癌细胞中P-gp表达的表达
        2.3.1 P-gp在卵巢癌A2780和A2780/Taxol细胞中的表达
        2.3.2 P-gp在乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADM细胞中的表达
    2.4 转染后卵巢癌和乳腺癌细胞增殖的改变
        2.4.1 转染后卵巢癌A2780/Taxol和A2780细胞增殖的改变
        2.4.2 转染后乳腺癌MCF-7/ADM细胞增殖的改变
3 讨论



本文编号：3880009