HPV E6通过靶向葡萄糖-6-磷酸脱氢酶调节宫颈癌细胞代谢

发布时间：2024-02-14 19:34

　　研究背景及目的:尽管有了早期筛查方法和疫苗接种,宫颈癌仍然有较高的发病率。据统计,宫颈癌位居女性恶性肿瘤发病率的第4位,且年轻女性的发病率有逐年上升的趋势,严重损害了女性的健康[1]。目前,高危人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染被广泛认为是宫颈癌发生的主要的因素。目前被定义的HPV病毒有150多种,根据它们感染的位置不同分为皮肤型和黏膜型,其中黏膜型又被分为高危型和低危型[2]。HPV16是宫颈普查样本和宫颈癌组织中最常见和最危险的类型,与宫颈癌的发生密切相关[3-5]。HPVE6(以下简称:E6)和E7是促进恶性肿瘤细胞持续转化的主要因素,其中,E6通过与多种细胞蛋白相互作用,进而调节细胞分化、粘附、极性、增殖、凋亡、基因转录和染色体稳定性,影响肿瘤细胞的发生发展[6-8]。肿瘤细胞的代谢异常在肿瘤进展中发挥了尤为重要的作用[9-10]。肿瘤代谢最大特点是有氧糖酵解,换句话说,在氧气充足的条件下肿瘤细胞也最大程度的在细胞内完成糖酵解,也被称为Warburg效应[11-13]。大部分葡萄糖分子通过葡萄糖转运蛋白进入细胞内,进行糖酵解代谢。然而,也有一小部分通过糖酵解的中间步骤进入磷酸戊糖...

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分: E6对磷酸戊糖途径的调控作用及机制
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 质粒、菌种、细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞消化、传代、计数、冻存
            2.2.2 慢病毒介导的E6基因敲除
            2.2.3 葡萄糖消耗量与ppp通量测定
            2.2.4 NADPH水平测定
            2.2.5 siRNA介导的G6PD基因沉默、Flag-E6介导的G6PD过表达
            2.2.6 E6过表达细胞系的构建
            2.2.7 统计学方法
    3 结果
        3.1 E6敲除对氧化ppp通量的影响
        3.2 E6敲除对葡萄糖消耗量的影响
        3.3 E6敲除对NADPH的影响
        3.4 E6敲除对G6PD活性的影响
        3.5 E6过表达对G6PD活性的影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分: E6与G6PD的相互作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 质粒、菌种、细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 Western Blot
            2.2.2 E6蛋白与G6PD蛋白免疫共沉淀
            2.2.3 GST pull down实验
            2.2.4 免疫荧光定位实验
    3 结果
        3.1 E6蛋白与G6PD蛋白在细胞内形成复合物
        3.2 E6蛋白与G6PD蛋白在体外直接结合
        3.3 E6蛋白与G6PD蛋白共定位于细胞质
    4 讨论
    5 结论
第三部分: p53在E6调控G6PD中的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 质粒、菌种、细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 E6过表达MEF细胞系构建
            2.2.2 荧光定量 PCR(Real-time PCR)
    3 结果
        3.1 p53在E6调控G6PD活性中的作用(翻译水平)
        3.2 p53在E6调控G6PD活性中的作用(转录水平)
    4 讨论
    5 结论
第四部分: G6PD在E6促进宫颈癌细胞增殖中的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 质粒、菌种、细胞系、动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 集落形成实验
            2.2.2 凋亡实验
            2.2.3 裸鼠成瘤实验
    3 结果
        3.1 G6PD基因沉默导致HPV E6阳性宫颈癌细胞增殖减少
        3.2 G6PD基因敲除导致HPV E6阳性宫颈癌细胞凋亡增加
        3.3 G6PD基因敲除导致HPV E6阳性宫颈癌细胞裸鼠体内成瘤减慢
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3898495