原核表达载体pET30a/ATRX-C 2193-2492 的构建与诱导表达

发布时间：2024-02-27 20:33

　　[目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_2193-2492基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_2193-2492,经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_2193-2492转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_2193-2492蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_2193-2492基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_2193-2492,且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_2193-2492能成功诱导...

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 ATRX-C2193-2492基因扩增
        1.2.2 p ET30a空质粒以及ATRX-C2193-2492PCR产物的双酶切、连接与转化
        1.2.3 重组载体p ET30a/ATRX-C2193-2492的鉴定
        1.2.4 6His-ATRX-C2193-2492蛋白诱导表达及鉴定
        1.2.5 6His-ATRX-C2193-2492蛋白的纯化
2 结果与分析
    2.1 PCR扩增ATRX-C2193-2492片段
    2.2 p ET30a/ATRX-C2193-2492载体的PCR鉴定
    2.3 p ET30a/ATRX-C2193-2492载体的双酶切鉴定
    2.4 融合蛋白6His-ATRX-C2193-2492的诱导表达及其鉴定
    2.5 融合蛋白6His-ATRX-C2193-2492的纯化
3 讨论
4 结论



本文编号：3912938