人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中程序性坏死的作用及调控机制研究

发布时间：2024-03-10 16:59

　　目的:本课题选用柳氮磺胺吡啶(SAS)作为氧化应激诱导剂,复制氧化应激模型,以人卵巢上皮性癌顺铂敏感细胞(SKOV3、A2780)与耐药细胞(SKOV3/DDP、OVCAR-3)为研究对象,研究卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞(SKOV3/DDP、OVCAR-3)中程序性坏死途径的作用,以及多功能蛋白p62/SQSTM1(简称p62蛋白)在此途径中的可能调控机制,揭示人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中程序性坏死途径的作用及其调控机制,为靶向程序性坏死途径、克服肿瘤耐药提供新思路。方法:(1)利用MTT法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞生存率的影响。(2)利用MTT法检测SAS和程序性坏死抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2780、OVCAR-3细胞生存率的影响。(3)RTCA法检测Nec-1与SAS联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP细胞生存率的影响。(4)利用Western blotting方法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP、A2...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
第1章 综述
    1.1 卵巢癌的类型以及耐药机制研究
    1.2 柳氮磺胺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)在科研工作方面的应用
    1.3 肿瘤细胞的死亡机制
        1.3.1 凋亡(apoptosis)
        1.3.2 自噬(autophagy)
        1.3.3 细胞程序性坏死(necroptosis)
        1.3.4 多功能蛋白p62 与程序性坏死
第2章 实验研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 人卵巢上皮性癌顺铂敏感细胞及顺铂耐药细胞的培养
        2.2.2 MTT比色法
        2.2.3 RTCA实时无标记细胞功能分析法
        2.2.4 Western blotting检测相关蛋白表达
        2.2.5 免疫共沉淀
        2.2.6 质粒的提取
        2.2.7 质粒的转染
        2.2.8 统计学分析
    2.3 实验结果
        第一部分 程序性坏死在人卵巢上皮性癌耐药细胞SKOV3/DDP及OVCAR-3的作用研究
            2.3.1 MTT法检测不同浓度SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3、SKOV3/DDP细胞生存率的影响
            2.3.2 MTT法检测不同浓度SAS对人卵巢上皮性癌A2780、OVCAR-3 细胞生存率的影响
            2.3.3 MTT法检测程序性坏死抑制剂Nec-1与SAS联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3及SKOV3/DDP细胞生存率的影响
            2.3.4 MTT法检测程序性坏死抑制剂Nec-1与SAS联合作用对人卵巢上皮性癌A2780及OVCAR-3 细胞生存率的影响
            2.3.5 RTCA法检测程序性坏死抑制剂Nec-1与SAS联合作用对人卵巢上皮性癌SKOV3及SKOV3/DDP细胞生存率的影响
            2.3.6 Westernblotting法检测SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3 及SKOV3/DDP细胞中RIP1、RIP3、MLKL及磷酸化蛋白表达情况
            2.3.7 Westernblotting法检测SAS对人卵巢上皮性癌A2780 及OVCAR-3 细胞中RIP1、RIP3、MLKL及磷酸化蛋白表达情况
            2.3.8 免疫共沉淀法(Immunoprecipitation,IP)检测程序性坏死复合体的表达
            2.3.9 SAS对人卵巢上皮性癌SKOV3 以及SKOV3/DDP细胞中p62蛋白表达的影响
            2.3.10 SAS对人卵巢上皮性癌A2780及OVCAR-3 细胞中p62 蛋白表达的影响
            2.3.11 人卵巢上皮性癌SKOV3、A2780 细胞中过表达zz结构域突变的p62 蛋白(zz-p62)对程序性坏死相关蛋白的影响
第3章 讨论
    3.1 程序性坏死等新型细胞死亡途径,为肿瘤防治带来新的思路
    3.2 SAS诱导人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞(SKOV3/DDP,OVCAR-3)发生程序性坏死
    3.3 多功能蛋白p62 参与SAS诱导人卵巢上皮性癌SKOV3/DDP、OVCAR-3 细胞程序性坏死调控
第4章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3925111