TGF-β1联合hUCMSCs移植对SUI模型鼠尿道周围结缔组织中Loxl-1、Fibulin-5和Elastin表达的

发布时间：2024-03-17 11:42

　　研究目的： 1.建立从足月剖宫产孕妇脐带分离间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）、体外传代培养扩增的方法，研究其生物学特征，为后续实验提供细胞源。 2.培养基中添加TGF-β1诱导人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）定向分化为成纤维细胞（fibroblast），为进一步实验奠定基础。 3.通过模拟人类妊娠分娩、难产、产伤、卵巢去势建立SD大鼠SUI的动物模型，将外源性TGF-β1联合hUCMSCs注射于尿道周围，根据尿动力学、喷嚏实验、尿道及膀胱组织形态学和弹性纤维的改变，观察细胞移植治疗对尿道及其周围组织和膀胱中Loxl-1、Fibulin-5和Elastin表达的影响，为SUI的治疗提供依据。 方法： 1．无菌条件下取足月剖宫产的健康新生儿近脐部脐带，应用组织块贴壁法分离培养。 2．应用流式细胞仪检测细胞表面标志物；光学显微镜下观察细胞的形态学特征；CCK8法检测细胞的增殖能力并绘制生长曲线；体外诱导其向成脂细胞和成骨细胞分化来鉴定其多向分化能力。 3.制备细胞爬片，实验组加TGF-β1（5ng/ml），对照组正常培养，诱导7天后免疫组化鉴定波形蛋...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1AhUCMSCs原代细胞（40×）

3.1hUCMSCs的体外分离培养及形态特征应用组织块贴壁法，约7-12天可见组织块的四周有成纤维状细胞爬出，贴壁生长，组织块的四周细胞呈集落状生长时（图1A），可以进行初次消化传代，传代后的细胞均匀分布在细胞培养瓶中。随着传代次数的增加，细胞逐渐得到纯化，形态均一（图1B），....

图1BhUCMSCsP3代细胞（40×）

组织块的四周细胞呈集落状生长时（图1A），可以进行初次消化传代，传代后的细胞均匀分布在细胞培养瓶中。随着传代次数的增加，细胞逐渐得到纯化，形态均一（图1B），呈放射状生长，形态以长梭形为主，增殖速度加快，一般约3-4天可再次进行消化传代。3.2hUCMSCs表面抗原的鉴定流式细....

图2hUCMSCs表面标记的表达

图2hUCMSCs表面标记的表达3.3hUCMSCs的生长周期和生长曲线的测定细胞生长周期提示大部分细胞处于静止期及DNA合成前期（G0-G蓝色区域），只有少数处于DNA复制期（S期，粉红色区域）、DNA合成后期，玫红色区域）（图3）。细胞生长曲线大致呈“....

图3P3代细胞生长周期

玫红色区域）（图3）。细胞生长曲线大致呈“S”形，传代培养细胞长较缓慢为潜伏期，对数生长期为3-5d，之后细胞增殖逐渐缓慢，5-7d期，平台期后如不进行传代培养，细胞则受到接触抑制而逐步死亡。以细时间（d）为横坐标，细胞吸光度值（OD450nm）为纵坐标绘制生长曲线(图

本文编号：3930979