高表达AKT3在宫颈癌顺铂获得性耐药中的功能研究

发布时间：2024-03-24 20:46

　　宫颈癌(cervical carcinoma)的发病率在女性恶性肿瘤中居第三位,仅次于乳腺癌。其死亡率高居第二位,严重危害女性健康。中晚期宫颈癌患者治疗以放化疗为主顺铂(Cisplatin,DDP)作为治疗宫颈癌的一线化疗药物在临床中使用广泛。然而治疗过程中产生的获得性耐药是其难治愈的原因之一。为探究潜在的顺铂耐药分子机制,我们在本研究中建立了人宫颈癌细胞顺铂耐药细胞系模型Hela/DDP,随后通过转录组测序(Transcriptome Sequencing,RNA-Seq)检测与Hela/DDP与Hela细胞中转录本表达。分析后筛选获得性耐药相关的差异表达基因。通过RNA-Seq数据比较人Hela/DDP与其亲本细胞系Hela的基因相对表达量,结果发现2,312个差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEGs)。其中包括1,437个上调基因和875个下调基因。将DEGs在GO,COG和KEGG数据库进行聚类分析。根据KEGG数据库分析结果,细胞中差异表达基因富集最多的信号通路为PI3K/AKT信号通路。实时荧光定量PCR(RT-q PCR)实验初...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 宫颈癌耐药概述
        1.1.1 宫颈癌简介
        1.1.2 宫颈癌的治疗
    1.2 顺铂概述
    1.3 个体化用药的概述
    1.4 转录组测序概述
    1.5 PI3K/AKT信号通路概述
    1.6 MK-22062HCl简介
    1.7 研究内容及意义
第二章 实验材料及方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 宫颈癌细胞株
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验耗材
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 常用缓冲液的配制
    2.2 细胞实验
        2.2.1 传代培养
        2.2.2 细胞换液
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞复苏
    2.3 耐药株构建
    2.4 细胞毒性实验
    2.5 转录组测序与分析
    2.6 PCR实验验证转录组测序结果
        2.6.1 Trizol法提取RNA
        2.6.2 反转录
        2.6.3 qRT-PCR实验
    2.7 siRNA合成及细胞转染实验
    2.8 蛋白免疫印迹实验
    2.9 细胞凋亡检测实验
第三章 实验结果
    3.1 宫颈癌顺铂耐药株模型建立
    3.2 转录组测序结果分析
    3.3 DEGs的功能聚类分析
    3.4 PCR验证转录组测序结果
    3.5 AKT3在顺铂耐药中的功能
        3.5.1 AKT3-siRNA和MK-2206抑制AKT3表达
        3.5.2 AKT3-siRNA、MK-2206增加Hela/DDP对顺铂的敏感性
        3.5.3 AKT3-siRNA诱导细胞凋亡
第四章 讨论
    4.1 转录组测序样本选择的局限性
    4.2 PI3K/AKT信号通路与宫颈癌顺铂耐药之间的关系
    4.3 宫颈癌细胞对顺铂耐药的其他通路研究
    4.4 顺铂耐药性与细胞凋亡之间的关联
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3937992