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ADAR1对子宫内膜异位症在位内膜细胞生物学功能的影响

发布时间:2024-06-02 21:22
  子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)简称内异症,是一种雌激素依赖性妇科疾病。近年来,子宫内膜异位症的发病率呈上升趋势,已成为育龄妇女最常见的妇科疾病之一[1]。内异症在组织病理学上为良性病变,但具有恶性肿瘤的生物学特征,如浸润、转移和复发等,少数患者可发生恶变。有研究显示,子宫内膜异位灶和一些相邻的妇科肿瘤有共同的基因改变,存在恶性转化的基因谱[2]。RNA编辑是一种重要的转录后修饰方式,可以造成遗传信息改变和蛋白质多样性[3]。在人类,最普遍的RNA编辑类型是A-to-I编辑,这一过程由作用于双链RNA(dsRNA)的腺苷脱氨酶家族(ADARs)催化形成[4]。ADARs家族包括三个成员:ADAR1,ADAR2和ADAR3。ADAR1和ADAR2在组织中普遍表达且具有RNA编辑活性,而ADAR3只表达于脑组织中,无编辑活性[5]。目前,ADAR1是研究最为明确且生物学功能尤为重要的一种腺苷脱氨酶。ADAR1介导的A-to-I RNA编辑的错误调控与肿瘤发生有关...

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图2.2ADAR1-ORF载体信息

图2.2ADAR1-ORF载体信息

图2.2ADAR1-ORF载体信息图2.2ADAR1-shRNA载体信息I数据库中找到ADAR1序列,根据此序列设计ADAR1扩段上设计4个shRNA靶位点,具体序列如下:


图2.2ADAR1-shRNA载体信息

图2.2ADAR1-shRNA载体信息

10图2.2ADAR1-shRNA载体信息I数据库中找到ADAR1序列,根据此序列设计ADAR1扩段上设计4个shRNA靶位点,具体序列如下:靶位点序列DAR1-shRNA15’-GCCTCAAATAACATGGTAADAR1-shRNA25’-C....


图1A.通过细胞免疫荧光法检测角蛋白的表达以鉴定子宫内膜上皮细胞;B.通过实时荧光定量PCR检测mRNA表达水平;C.Western-blot法检测ADAR1过表达和下调后的蛋白表

图1A.通过细胞免疫荧光法检测角蛋白的表达以鉴定子宫内膜上皮细胞;B.通过实时荧光定量PCR检测mRNA表达水平;C.Western-blot法检测ADAR1过表达和下调后的蛋白表

细胞免疫荧光法检测荧光角蛋白的表达,对子宫内膜上皮细胞进行鉴定,其中显示绿色荧光的部分为子宫内膜上皮细胞中特有的角蛋白,最终得到的子宫内膜上皮细胞纯度为95%左右(图1A)。通过RT-qPCR法检测各组中ADAR1mRNA的表达水平,应用Westernblot法检测ADAR....


图2A.CCK-8法检测子宫内膜细胞过表达ADAR1和沉默ADAR1前后细胞的活力;B.Edu法检测子宫内膜细胞的增殖能力

图2A.CCK-8法检测子宫内膜细胞过表达ADAR1和沉默ADAR1前后细胞的活力;B.Edu法检测子宫内膜细胞的增殖能力

27A.CCK-8法检测子宫内膜细胞过表达ADAR1和沉默ADAR1前后细胞B.Edu法检测子宫内膜细胞的增殖能力。**P<0.01,***P<0.001。R1对各组子宫内膜细胞侵袭和迁移的影响ell侵袭实验结果表明ADAR1-OE组穿过基底膜的细胞数较....



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