miR-889-3p通过靶向Smad7调控妊娠期糖尿病的糖代谢

发布时间：2024-06-05 03:35

　　目的:妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠期最常见的糖代谢异常类型,占妊娠高血糖的80-90%,显著增加孕妇及其子代近期和远期不良结局。其致病机制与2型糖尿病类似,即胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和胰岛β细胞功能减退。机体内胰岛素主要通过靶器官发挥生物学作用,其中肝脏是最主要的靶器官之一。肝脏胰岛素抵抗主要表现为胰岛素抑制肝脏葡萄糖输出的能力下降,导致肝糖输出增多,血糖升高;同时IR还影响脂代谢,引起脂质代谢产物的堆积,降低胰岛素敏感性,进一步加重IR,主要的病理特征是肝脏胰岛素信号通路异常,糖异生和糖原分解增加。近年来的研究发现非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)在转录和转录后都具有一系列重要的调节潜能。其中,微小RNA(microRNA,mi RNA)是一类长度在19-24个核苷酸之间的ncRNA,通过与靶基因的3’非翻译区结合来影响mRNA的降解和翻译抑制。现阶段越来越多的证据表明,miRNA参与多种病理生理过程,且其异常表达与人类疾病密切相关。Smad家族是细胞内重要的信号转导因子...

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:妊娠期糖尿病胎盘的全转录组测序表达谱
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 实验方法和步骤
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 GDM诊断标准
            2.2.3 组织标本的采集
            2.2.4 高通量测序
            2.2.5 实时定量聚合酶链式反应
            2.2.6 GO和 KEGG富集分析
            2.2.7 竞争性内源RNA网络
        2.3 统计学方法
    3 结果
        3.1 非编码RNA的一般特征
        3.2 差异表达非编码RNA的一般特征
        3.3 差异表达非编码RNA的验证
        3.4 GO和 KEGG富集分析
        3.5 竞争性内源RNA网络
    4 讨论
    5 结论
第二部分:GDM孕鼠的肝脏糖脂代谢变化和mi R-889-3p的表达
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 实验方法和步骤
            2.2.1 妊娠期糖尿病孕鼠模型的构建与分组
            2.2.2 腹腔注射葡萄糖耐量试验
            2.2.3 酶联免疫吸附法测定胰岛素水平
            2.2.4 糖代谢相关指标
            2.2.5 组织标本的采集
            2.2.6 肝脏组织苏木精-伊红染色
            2.2.7 肝脏组织油红O染色
            2.2.8 肝脏组织甘油三酯含量的检测
            2.2.9 肝脏组织糖原含量的检测
            2.2.10 荧光原位杂交
            2.2.11 实时定量聚合酶链式反应
            2.2.12 蛋白质免疫印迹法
        2.3 统计学方法
    3 结果
        3.1 孕鼠体重和糖代谢的变化
        3.2 miR-889-3p在孕鼠胎盘和肝脏组织中的表达
            3.2.1 miR-889-3p在孕鼠胎盘组织中的表达
            3.2.2 miR-889-3p在孕鼠肝脏组织中的表达
        3.3 孕鼠肝脏组织形态学的变化
            3.3.1 肝脏组织HE染色结果
            3.3.2 肝脏组织油红O染色结果
        3.4 孕鼠肝脏组织甘油三酯含量的比较
        3.5 孕鼠肝脏组织糖原含量的比较
        3.6 孕鼠肝脏组织糖异生途径关键酶基因的比较
        3.7 孕鼠肝脏组织胰岛素信号通路的比较
            3.7.1 孕鼠肝脏组织IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的 m RNA相对表达量的比较
            3.7.2 孕鼠肝脏组织IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的蛋白表达的比较
    4 讨论
    5 结论
第三部分:mi R-889-3p通过靶向Smad7 调控GDM肝脏胰岛素敏感性和糖代谢
    1前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 实验方法和步骤
            2.2.1 妊娠期糖尿病孕鼠模型的构建与分组
            2.2.2 组织标本的采集
            2.2.3 荧光素酶报告基因
            2.2.4 实时定量聚合酶链式反应
            2.2.5 蛋白质免疫印迹法
            2.2.6 细胞培养
            2.2.7 细胞模型的建立
            2.2.8 细胞转染和分组
            2.2.9 葡萄糖剩余含量的测定
            2.2.10 实时定量聚合酶链式反应
            2.2.11 蛋白质免疫印迹法
            2.2.12 Smad7激动剂的干预
        2.3 统计学方法
    3 结果
        3.1 荧光素酶报告基因证实Smad7是mi R-889-3p的靶基因
        3.2 孕鼠肝脏组织Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α表达的比较
            3.2.1 孕鼠肝脏组织Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的 m RNA相对表达量的比较
            3.2.2 孕鼠肝脏组织Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的蛋白表达的比较
        3.3 胰岛素抵抗细胞模型的建立
        3.4 实时定量聚合酶链式反应检测miR-889-3p
        3.5 miR-889-3p对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖剩余量的影响
        3.6 miR-889-3p对肝细胞糖异生关键酶基因表达的影响
        3.7 miR-889-3p对肝细胞胰岛素信号通路相关因子表达的影响
            3.7.1 mi R-889-3p对肝细胞IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的 m RNA相对表达量的影响
            3.7.2 mi R-889-3p对肝细胞IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的蛋白表达的影响
        3.8 mi R-889-3p对肝细胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α表达的影响
            3.8.1 mi R-889-3p对肝细胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的mRNA相对表达量的影响
            3.8.2 mi R-889-3p对肝细胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的蛋白表达的影响
        3.9 激动Smad7在mi R-889-3p调控肝细胞胰岛素敏感性和糖代谢中的作用
            3.9.1 实时定量聚合酶链式反应检测miR-889-3p
            3.9.2 激活Smad7后mi R-889-3p对肝细胞培养基葡萄糖剩余量的影响
            3.9.3 激活Smad7后mi R-889-3p对肝细胞糖异生关键酶基因表达的影响
            3.9.4 激活Smad7后mi R-889-3p对肝细胞胰岛素信号通路相关因子表达的影响
            3.9.5 激活Smad7后mi R-889-3p对肝细胞Smad3,Fox O1和PGC-1α表达的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3989591