Prl7d1敲除对小鼠胎盘发育的影响

发布时间：2025-02-09 16:28

　　目的:Prolactin family 7,subfamily d,member 1(Prl7d1)是催乳素家族成员之一,表达于胎盘。在小鼠妊娠第12天,其表达水平达到高峰。体外研究表明,Prl7d1具有抗血管生成作用,但其在体内胎盘发育中的生理作用尚不清楚。因此,我们利用Prl7d1敲除(Knock-out,KO)小鼠模型,探讨Prl7d1在妊娠中期胎盘中的生物学功能及可能的调控机制,为阐明正常和病理妊娠的分子机制提供基础。方法:1.利用TALEN技术构建Prl7d1 KO小鼠模型,繁殖小鼠通过鼠尾DNA测序鉴定基因型,妊娠中期胎儿通过双重PCR鉴定性别。2.通过western blot和免疫组化观察PRL7D1在胎盘中的表达情况。3.利用HE染色、PAS染色、MASSON染色及免疫组化等方法观察胎盘的形态学改变。4.收集妊娠中期胎盘组织,进行RNA-Seq高通量测序,分析Prl7d1调控胎盘发育可能的下游信号通路。结果:1.Prl7d1在WT小鼠胎盘的交界区(Junctional zone,JZ)表达,而在KO小鼠中没有表达。2.Prl7d1 KO导致母鼠产仔量减少,妊娠中期子宫活胚...

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【学位级别】：硕士

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前言
1 材料
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂与耗材
    1.3 主要仪器与设备
    1.4 引物
2 方法
    2.1 主要试剂配制
    2.2 Prl7d1 KO 小鼠制备
    2.3 小鼠基因型鉴定
    2.4 小鼠繁殖实验
    2.5 妊娠中期胚胎获取
    2.6 组织蛋白提取及蛋白浓度测定
    2.7 Western blot
    2.8 HE 染色
    2.9 Masson 染色
    2.10 PAS 糖原染色
    2.11 PRL7D1 免疫组化
    2.12 CD34 与 Perforin 1 免疫组化与分析
    2.13 组织总 RNA 提取
    2.14 qR T-PCR
    2.15 RNA-Seq 高通量测序
    2.16 生物信息学分析
    2.17 统计学分析
3 结果
    3.1 小鼠基因型测序鉴定结果
    3.2 western blot 验证 Prl7d1 有效敲除
    3.3 PRL7D1 在妊娠中期胎盘中的定位
    3.4 Prl7d1 KO 导致孕鼠产仔量及妊娠中期胚胎数量减少
    3.5 Prl7d1 KO 孕鼠胎盘的一般表型特征
    3.6 Prl7d1 对胎盘糖原滋养层细胞发育的影响
    3.7 Prl7d1 对蜕膜 uN K 细胞分布的影响
    3.8 Prl7d1 缺失对胎盘血管的影响
    3.9 Prl7d1 缺失对孕鼠胎盘组织基因表达谱的影响
    3.10 组织表达富集分析
4 讨论
    4.1 Prl7d1 KO 影响生殖能力
    4.2 Pr17d1 参与胎盘细胞的发育和分化
    4.3 Pr17d1 参与子宫螺旋动脉重塑
    4.4 Pr17d1 缺失导致胎盘基因表达谱变化
    4.5 Prl7d1 缺失可能导致胎盘细胞类型特异性发育的改变
5 全文总结
参考文献
文献综述：小鼠催乳素家族与妊娠
    参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文



本文编号：4032529