孕期炎症刺激对子代大鼠血脂代谢的影响及其机制

发布时间：2017-05-30 18:09

  本文关键词：孕期炎症刺激对子代大鼠血脂代谢的影响及其机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：循环系统疾病是一种具有高患病率、高死亡率以及高致残率的疾病,并随着生活水平的提高其发病率逐年上升,并且每年因该类疾病死亡的患者高达1500万,位列各种死亡原因之首。然而其却是可以通过各种预防措施大大降低发病率的疾病,因而较早的及时预防措施在该类疾病的防治上具有极其重要的意义。本实验采用孕期炎症刺激大鼠模型,将大鼠血脂调节的影响机制追溯至生命起源初期,通过研究孕期刺激对子代大鼠血脂、肝脏、线粒体以及基因的影响,揭露孕期刺激导致子代大鼠易患循环系统疾病的初步机制。并且在孕期刺激模型的基础上,我们对子代大鼠给予高脂饮食的干预,进一步探讨了孕期宫内不良环境对子代大鼠血脂代谢的具体影响,从全新的角度揭露血脂代谢紊乱发病机制,为相关疾病的防治提供了新的方向。方法1.模型大鼠分组将孕鼠随机分为两组,对照组以及LPS刺激组。对照组:于孕期8-14天每天腹腔给予无菌生理盐水0.5ml;LPS刺激组:在孕期第8、10、12天按体重腹腔注射LPS0.79 mg/kg,在孕期第9、11、13、14天腹腔注射生理盐水0.5ml。待子鼠成长至四周龄后,将对照组子代大鼠随机分成两组:对照组和单纯高脂组。将LPS刺激组子代大鼠随机分成两组:LPS刺激组和LPS刺激合并高脂组。对照组与LPS刺激组给予正常饮食分笼饲养,单纯高脂组与LPS刺激合并高脂组给予高脂饮食分笼饲养,直至大鼠8周龄。2.模型大鼠相关指标检测于各组子代大鼠出生时算起,每周测量其体重;8周龄时检测其血浆血脂、肝功指标;HE染色观察肝脏病理形态;电子透射显微镜观察肝细胞病理改变;蛋白免疫印迹分析线粒体电子呼吸链复合物蛋白表达;基因芯片筛选胆固醇代谢基因的改变;并对线粒体膜电位、细胞色素C氧化酶活性以及ATP含量进行测定。结果1、孕期炎症刺激对子代大鼠血脂的影响正常饲养条件下,lps刺激组子代大鼠较对照组tc(p0.01)、tg(p0.01)以及ldl-c(p0.05)水平有所增加;给予高脂饮食后,lps刺激合并高脂组较对照组tc(p0.01)、tg(p0.01)以及ldl-c(p0.05)水平出现显著升高,并且lps刺激合并高脂组与lps组比较tc(p0.01)、tg(p0.01)以及ldl-c(p0.05)水平同样也较为显著的增加;同时lps刺激组子代大鼠出生一周后体重显著高于对照组(p0.01)。给予高脂饮食后lps刺激合并高脂组体重增加率更为显著(p0.05)。2、孕期炎症刺激对子代大鼠肝脏的影响he染色切片显示对照组组织结构清晰,细胞界线明显,lps刺激组出现肝细胞肿胀,细胞间隙消失,细胞内偶有脂滴空泡出现,肝内出现轻微炎细胞浸润。高脂饮食导致肝细胞出现轻微肿胀同时出现脂滴空泡,在lps刺激合并高脂饲养组出现了脂滴空泡,肝细胞肿大等显著病理改变。在高脂饲养条件下会导致子代大鼠alt水平显著升高(p0.01),lps刺激合并高脂组alt(42.00±13.11u/l)较对照组alt(22.67±2.66u/l)水平显著升高(p0.01);lps刺激组ast(74.17±5.04u/l)水平较对照组ast(61±5.14u/l)水平有所升高(p0.05),lps刺激合并高脂组ast(105.83±18.88u/l)水平较对照组(61.00±5.14u/l)水平有显著升高(p0.01)(正常大鼠alt、ast水平参考范围:alt:23.5-71.9u/l,ast:61.2-137.5u/l)。3、孕期炎症刺激对子代大鼠胆固醇代谢基因的影响通过对88个胆固醇代谢相关基因的筛选,发现lps刺激会导致子代大鼠apoc1、apoc3、cyp46a1、cyp7b1、dhcr24、lipe、olr1、ppard、prkaa2、tm7sf2、vldlr以及sor11等12个基因的表达出现异常。4、孕期炎症刺激对子代大鼠线粒体的影响电子透射显微镜观察发现正常对照组肝脏线粒体为椭圆形,具有完整的双层膜结构,里嵴规则界线明显;lps刺激组线粒体呈不规则,或者球状,表明线粒体出现了肿胀,相同视野下线粒体数量显著增加,部分里嵴出现断裂,部分双层膜结构被破坏,严重者出现线粒体空泡化;给与高脂饲养后单纯高脂组出现了部分线粒体的损伤;lps刺激合并高脂组线粒体损伤明显,出现显著病理改变;孕期炎症刺激子代大鼠肝脏线粒体膜电位下降显著(p0.01),其下降水平与单纯高脂饲养水平相当,lps刺激合并高脂组线粒体膜电位水平下降较lps刺激组下降明显(p0.01);高脂饲养会导致大鼠肝脏细胞内atp含量显著升高(p0.01),lps刺激组肝细胞atp含量低于对照组(p0.05).lps刺激合并高脂组细胞atp含量较lps刺激组略有上升(p0.05),其含量与对照组相当;高脂饲养显著降低肝细胞线粒体细胞色素c氧化酶活性(p0.05),然而LPS会导致该酶活性的显著上升(P0.01);与对照组比较,LPS刺激组complex I蛋白表达有显著升高(P0.01),而complex III与complex V表达无统计学差异,complex II表达显著降低(P0.01)。而高脂饲养会导致complex I、II、III、V的表达都显著降低(P0.01);同时孕期炎症刺激会导致子代大鼠线粒体mtDNA4977片段缺失显著增加(P0.01),水平与高脂饮食导致的该片段缺失丰度相当,LPS刺激合并高脂饮食使得mtDNA4977缺失丰度较单纯LPS刺激或者单纯高脂饮食条件下急剧升高(P0.01)。结论1孕期炎症刺激可导致子代大鼠血脂代谢紊乱,增加其对高脂摄入的敏感性,并加重肝脏的损伤。2胆固醇代谢相关基因表达异常以及线粒体的损伤可能是孕期炎症刺激导致子代大鼠脂质紊乱的重要机制之一。
【关键词】：动脉粥样硬化 线粒体 血脂 孕期炎症刺激 基因芯片 胆固醇
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 缩略词表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 引言13-18
• 第一章 孕期炎症刺激对子代大鼠血脂的影响18-37
• 1.0 前言18
• 1.1 实验材料18-22
• 1.2 结果22-33
• 1.3 讨论33-36
• 1.4 结论36-37
• 第二章 孕期炎症刺激导致子代大鼠血脂紊乱机制初探37-64
• 2.0 前言37-38
• 2.1 实验材料38-48
• 2.2 结果48-59
• 2.3 讨论59-64
• 全文结论64-65
• 参考文献65-71
• 文献综述 Mitochondria and related signal pathways in atherosclerosis71-85
• References81-85
• 攻读学位期间的研究成果85-86
• 致谢86

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本文编号：407670