TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol对宫颈癌化疗增敏的研究

发布时间：2017-06-14 13:14

  本文关键词：TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol对宫颈癌化疗增敏的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：阿霉素等传统化疗药物作为有效的抗癌药物而广泛地应用于临床,但最近研究发现多种肿瘤细胞易对化疗药物产生耐药性,这就导致了在治疗癌细胞的过程中化疗药物的量要不断增加,这也会对机体产生极大的毒副作用,因此寻求一种高效安全的抗肿瘤药物是目前药物研究的主要方向。据文献报道一些化疗药物可激活核转录因子κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB),NF-κB的激活抑制了化疗剂的细胞毒性的潜力,导致癌细胞产生耐药性。转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase 1,TAK1)是丝裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶(MAPKKK)家族中的一员,通过激活JNK/p38、MAPK和NF-κB信号通路参与促炎细胞信号通路。最近研究表明,TAK1还激活IκB激酶(IKKs),最终导致NF-κB的活化。前期研究发现一个真菌源的天然二羟基内酯5Z-7-oxozeaenol(简称,5Z-7),是一个TAK1高效的抑制剂,而其对MAPKKK家族的其他成员如MEKK1和ASK 1的激酶活性没有显著的效果,其对TAK1的抑制具有专一性。在宫颈癌细胞中,关于TAK1是否参与NF-κB活性的调节,以及TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol(简称,5Z-7)是否对宫颈癌细胞凋亡及NF-κB活性产生影响尚鲜有报道。本研究以宫颈癌细胞为细胞模型,研究了TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol与化疗药物联用抑制人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阳性和阴性宫颈癌细胞生长和诱导细胞凋亡作用,初步阐明5Z-7-oxozeaenol抗宫颈癌的作用机制,可为化合物5Z-7-oxozeaenol治疗宫颈癌提供新途径和理论依据。本研究结果主要包括以下内容:1.TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol可增强阿霉素对宫颈癌细胞的细胞毒作用本研究以4种HPV阳性宫颈癌细胞He La,Si Ha,Ca Ski,ME-180为实验材料,通过CCK-8法发现5Z-7对HPV阳性宫颈癌细胞有较强的体外抗细胞生长活性。当5μM 5Z-7与0.5μM阿霉素(Dox)共同处理细胞48 h时,对He La,Ca Ski,ME-180三种细胞的抑制率分别为60%,70%和85%,都与0.5μM阿霉素(Dox)单药处理组相比差异显著((P0.05)。当2μM 5Z-7与0.5μM阿霉素(Dox)共同处理细胞48 h时,对Si Ha细胞的抑制率为40%,与0.5μM阿霉素(Dox)单药处理组相比差异显著(P0.01),结果表明5Z-7与阿霉素(Dox)联用显著抑制了HPV阳性宫颈癌细胞生长。软琼脂(Soft Agar Assay)实验结果表明,0.5μM 5Z-7与0.05μM阿霉素(Dox)共同处理He La细胞14 d时与0.05μM阿霉素(Dox)单独用药组相比有明显差异(P0.01),说明二者联用对宫颈癌细胞非锚定生长有明显抑制作用。用同样的实验方法对HPV阴性宫颈癌细胞C-33-A进行了检测,也发现5Z-7可协同阿霉素(Dox)对C-33-A有较强的体外抗细胞生长活性。2.TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol可协同阿霉素促进宫颈癌细胞凋亡流式细胞术检测结果表明5Z-7可协同阿霉素(Dox)促进He La细胞凋亡。Western blotting结果显示二者联用促进了HPV阳性宫颈癌细胞He La,Si Ha,Ca Ski,ME-180的凋亡蛋白PARP裂解为小片段,表明5Z-7增强了阿霉素(Dox)对宫颈癌的诱导凋亡作用。采用Western blotting方法对HPV阴性宫颈癌细胞C-33-A进行了检测,也发现5Z-7可协同阿霉素(Dox)对促使C-33-A的凋亡蛋白PARP裂解为小片段,对C-33-A具有诱导凋亡的作用。3.TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol通过阻断NF-κB信号通路增强阿霉素对He La细胞的化疗作用。本研究通过Western blotting比较Dox单独作用于细胞以及Dox与TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol联合作用于HPV阳性宫颈癌细胞He La,结果显示,5Z-7与阿霉素(Dox)联用后与阿霉素(Dox)单药组相比磷酸化JNK和p38表达下调,但使得相应时间点IκBα表达上调,说明在HPV阳性宫颈癌细胞中5Z-7可阻断由阿霉素(Dox)引发的TAK1参与的NF-κB的激活。用同样的实验方法对HPV阴性宫颈癌细胞C-33-A进行了检测,也发现5Z-7可在C-33-A中阻断由阿霉素(Dox)引发的TAK1参与的NF-κB的激活。综上所述,我们可以得出结论:1)TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol可增强阿霉素对宫颈癌细胞的细胞毒作用。2)TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol可增强阿霉素对宫颈癌细胞的促凋亡作用。3)TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol通过阻断NF-κB信号通路增强阿霉素对宫颈癌细胞的化疗作用。以上结论预示5Z-7-oxozeaenol是一种具有良好开发前景的潜在的抗肿瘤药物,本研究可为化合物5Z-7-oxozeaenol抗肿瘤药物研制与开发应用提供基础资料。
【关键词】：TAK1抑制剂 5Z-7-oxozeaenol 化疗 HPV 宫颈癌
【学位授予单位】：新疆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文缩略语11-12
• 第一章 文献综述12-22
• 1 宫颈癌的研究进展12-13
• 2 TAK1及其抑制剂 5Z7oxozeaenol的研究进展13-14
• 3 NF- κB通路的作用机制14-17
• 4 本研究的目的及意义17
• 参考文献17-22
• 第二章 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞的化疗增敏作用及其相关机理的初步探究22-59
• 摘要22-23
• 英文摘要23-24
• 引言24-25
• 1 材料25-26
• 1.1 主要试剂及仪器25-26
• 1.1.1 抗体和试剂25-26
• 1.1.2 仪器26
• 1.2 细胞系26
• 1.3 小分子TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol溶解体系的配制26
• 2 方法26-30
• 2.1 细胞培养26-27
• 2.2 Western Blotting印迹检测27-28
• 2.3 CCK-8 细胞活力检测28-29
• 2.4 软琼脂试验29
• 2.5 碘化丙啶(PI)染色测定29-30
• 2.6 统计分析30
• 3 结果与分析30-52
• 3.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对宫颈癌细胞的细胞毒作用的影响30-40
• 3.1.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阳性宫颈癌细胞的生长的影响30-32
• 3.1.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阴性宫颈癌细胞的生长的影响32-33
• 3.1.3 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞系IC50值的影响33-34
• 3.1.4 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阳性宫颈癌细胞形态的影响34-36
• 3.1.5 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阴性宫颈癌细胞形态的影响36
• 3.1.6 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阳性宫颈癌细胞He La集落形成的作用36-38
• 3.1.7 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阴性宫颈癌细胞C33A集落形成的作用38-40
• 3.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞凋亡的影响40-44
• 3.2.1 流式细胞仪法检测药物作用对细胞凋亡的影响40-42
• 3.2.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阳性宫颈癌细胞凋亡相关因子的影响42-43
• 3.2.3 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol联用阿霉素对HPV阴性宫颈癌细胞凋亡相关因子的影响43-44
• 3.3 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞中NF-κB信号通路的影响44-52
• 3.3.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞中的IκBα 表达水平的影响44-47
• 3.3.1.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对HPV阳性He La细胞中的IκBα 表达水平的影响44-45
• 3.3.1.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对HPV阴性C33A细胞中的IκBα 表达水平的影响45-47
• 3.3.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影响47-49
• 3.3.2.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌HPV阳性He La细胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影响47-48
• 3.3.2.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌HPV阴性C33A细胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影响48-49
• 3.3.3 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影响49-52
• 3.3.3.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对HPV阳性He La细胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影响49-51
• 3.3.3.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对HPV阴性C33A细胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影响51-52
• 4 讨论52-56
• 4.1 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol可增强阿霉素对宫颈癌细胞的细胞毒作用52-53
• 4.2 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol可增强阿霉素对宫颈癌细胞的促凋亡作用53-54
• 4.3 TAK1抑制剂 5Z7oxozeaenol对宫颈癌细胞中NF-κB信号通路具有阻断作用54-56
• 参考文献56-59
• 结论与展望59-60
• 个人简历60-61
• 致谢61-63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈柏年;杜冠华;;坏死性凋亡:一种新的细胞死亡方式[J];生理科学进展;2010年02期

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本文编号：449579