甘露糖结合凝集素对妊娠期糖尿病孕妇外周血单个核细胞炎症因子调节作用的研究

发布时间：2017-06-17 04:11

  本文关键词：甘露糖结合凝集素对妊娠期糖尿病孕妇外周血单个核细胞炎症因子调节作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本实验通过检测实验干预前GDM组和对照组血浆细胞因子(IL-1、IL-10和TNF-a)及蛋白(TLR4、NF-κB)的表达是否存在差异性；在此基础上以1μg/mlLPS诱导建立GDM孕妇外周血单个核细胞的炎症活化模型,建模成功后予不同浓度的重组MBL (0.1、0.5、1.0、2.0μg/ml)干预通过检测细胞因子和蛋白的表达水平变化来探讨其对孕妇单个核细胞的脂多糖Toll样受体(Toll-receptor,TLR) 4/核转录因子-K B信号通路活性的调节作用,从而探讨MBL在GDM炎症损伤机制中的作用。方法严格消毒后取孕妇空腹肘静脉血15 ml,采用密度梯度离心法分离收集血浆和单个核细胞,调单个核细胞6*106个/L分7组,其中1组用于和对照组进行各指标(细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α和蛋白TLR4、NF-κB)比对,余6组予LPS和不同浓度的重组MBL (0.1、0.5、1.0、2.0μg/ml)处理分别标记为A组(未处理组)、B组(仅LPS处理组)、C组(LPS+0.1μg/ml处理组)、D组(LPS+0.5μg/ml处理组)、E组(LPS+1.0μg/ml处理组)、F组(LPS+2.0μg/ml处理组),采用酶联免疫吸附法(Enzyme Llinked Immunosorbent Assay,ELISA)和蛋白印迹法(Western-Blot, WB)检测各组血浆细胞因子(IL-1、IL-10和TNF-a)和细胞总蛋白(TLR4、NF-κB)的表达水平变化情况。数据分析采用独立样本t检验、方差分析、LSD检验和Pearson相关分析检验方法。结果(1)GDM组血浆脂多糖水平高于对照组[(0.92±0.41)与(0.57±0.22)EU/ml,t=3.21]; MBL水平低于对照组[(254.4±123.4)与(424.8±150.4)μg/ml,t=-1.96]; IL-1和TNF-a水平均高于对照组[分别为(14.5±2.1)与(10.5±±4.0)pg/ml, (5.72±0.99)与(2.79±0.87) pg/ml, t值分别为-3.46和3.77],差异均具有统计学意义(P值均0.05)；IL-10与对照组比较无明显差异[为(4.4±0.9)与(3.0±1.0)pg/ml,t=-4.37],差异无统计学意义(P值≥0.05)。(2)Pearson相关分析结果显示,GDM组中炎症因子水平(IL-1、IL-10和TNF-a)与脂多糖水平均正相关(r1=0.78,r2=0.81,r=3=0.83,P值均0.05),与MBL水平呈负相关(rl=-0.71,r2=-0.51,r3=0.68,P值均0.05)；脂多糖与MBL水平呈负相关(r=-0.51,P0.05)。(3)GDM组与对照组孕妇单个核细胞基础细胞总蛋白进行比较发现,GDM组外周血单个核细胞TLR4和NF-κB蛋白表达水平均高于对照组[分别为1.85±0.41与1.27±0.72,1.20±0.62与0.84±0.31,t值分别为-13.57和-7.19,P值均0.05]。(4)细胞培养结果显示：采用脂多糖和不同浓度重组MBL干预后,实验各组均与B组进行比较,其中与B组比较C组IL-1、IL-10、TNF-a水平及TLR4、NF-K B蛋白表达量[分别为(15.44±2.29)、(4.77±1.84)、(5.83±1.08)pg/ml及2.01±0.15、1.47±0.04],随着重组MBL浓度的增加,D组[分别为(13.37±1.34)、(3.13±1.71)、(4.23±1.71)pg/ml及1.58±0.69、1.20±0.16]、E组[分别为(12.18±1.38)、(2.72±0.69)、(3.15±0.78)pg/ml及0.85±0.02、0.89±0.02]、F组[分别为(10.59±1.20).、(2.03±0.92)、(2.71±0.96)pg/ml及0.56±0.44、0.61±0.21]逐渐降低,差异均具有统计学意义(P值均0.05)。结论1.妊娠期糖尿病孕妇血浆脂多糖水平较高,MBL水平较低；这种病理状态可能与GDM炎症发病机制有关。2.妊娠期孕妇血浆MBL和脂多糖联合细胞因子(IL-1、IL-10、TNF-a)检测可能成为预测GDM比较有临床价值的生化指标。3.孕妇血浆MBL水平较低,可能导致对TLR4/NF-κB通路的抑制作用减弱,从而形成慢性持续性炎症损伤,参与GDM发生发展。
【关键词】：妊娠期糖尿病 甘露糖结合凝集素 脂多糖 炎症因子
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.256
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1. 前言12-16
• 2. 材料与方法16-25
• 3 结果25-29
• 4. 讨论29-33
• 5. 结论33-34
• 参考文献34-39
• 附录39-41
• 个人简历39-41
• 致谢41-43
• 综述43-51
• 参考文献48-51

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本文编号：457335