Notch信号通路在姜黄素介导光动力治疗宫颈癌的作用机制研究

发布时间：2017-06-20 02:02

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【摘要】：宫颈癌(Cervical cacer)以其发病率高、死亡人数多,已成为当今危害女性生命的第二大恶性肿瘤,仅次于乳腺癌,是目前医学领域研究的重要课题之一。本实验运用光动力疗法(photodynamic therapy, PDT),结合传统光敏性中药-姜黄素,共同研究其对宫颈癌体外移植瘤的影响。并探讨姜黄素联合光动力治疗宫颈癌的作用机制,为临床治疗宫颈癌提供借鉴。目的：1.体外培养宫颈癌Me-180细胞,构建宫颈癌体外移植瘤模型2.验证姜黄素介导的PDT疗法对宫颈癌体外移植瘤的影响3.阐明姜黄素-PDT治疗宫颈癌的作用机制方法：将宫颈癌Me-180细胞悬液接种于BALB/C裸鼠背部皮下,每只接种100μL,经过2-3天潜伏期,接种处可见一豆粒大小的移植瘤出现,呈圆形或椭圆形结节状,提示宫颈癌体外移植瘤模型建立成功。造模成功率为100%。当肿瘤直径达到约0.8-1.Ocm时,进行后续试验。实验分为5组,分别为模型组、单独光照组、姜黄素组、姜黄素-PDT组以及阻断剂组。每组12只,共60只。其中模型组：肿瘤局部注射100 μ L生理盐水,余不做任何处理。单独PDT组：肿瘤局部注射100 μL生理盐水,给予435nm波长,照射剂量为100J/cm2的光照,光纤末端距离肿瘤表面2-3cm,照射面积约为1cm2,照射时间为20min。姜黄素组：在肿瘤局部注射浓度为50 μ M/L的姜黄素溶液100μL,给予自然光照。姜黄素-PDT组：在肿瘤局部注射浓度为50 μ M/L的姜黄素溶液100uL,给药后6小时行PDT治疗。阻断剂组：按照100mg/kg的计量,隔天腹腔注射Notch信号特异性阻断剂DAPT溶液,PDT前6小时给予肿瘤局部注射浓度为50μmol/L的姜黄素溶液100 μL,6小时后行PDT照射治疗。在治疗一天后,处死6只裸鼠,余下6只继续记录肿瘤体积大小。通过计算各组肿瘤体积,观察不同时间点及各组间肿瘤体积的变化。制备肿瘤石蜡切片,观察各组HE染色结果。免疫组织化学法观察各组中Notch-1、NF-κB以及VEGF的表达变化。Westen-blot检测各组中Notch-1、NF-κB以及VEGF的表达变化。结果：1.在注入宫颈癌Me-180细胞悬液后1-2天,接种部位可见一米粒大小的肿物,随着时间逐渐增大,提示造模成功。2.姜黄素联合光动力疗法对宫颈癌体外移植瘤体积的影响：各组间相同时间点比较：治疗后模型组肿瘤体积呈增大趋势,与模型组相比,姜黄素组与姜黄素联合光动力治疗组在1天时肿瘤体积有统计差异(P0.05)；第3天时各组与模型组均有统计差异(P0.05),其中姜黄素组与姜黄素+PDT组有显著差异(P0.01)；第7天各组均有统计差异(P0.05),其中单纯光照组与姜黄素联合光动力治疗组有显著差异(P0.01)；第14天姜黄素组有统计差异(P0.05),姜黄素联合光动力治疗组差异显著(P0.01)。第21天姜黄素组有统计差异(P0.05),姜黄素联合光动力治疗组有显著差异(P0.01)。组内不同时间点比较：与治疗前肿瘤体积相比,模型组从第14天开始有统计差异,21天差异显著；单纯光照组第14天时有统计差异,21天差异显著；姜黄素组第14天时有统计差异,21天差异显著；姜黄素+PDT组：21天时有显著统计差异。3.HE染色结果：模型组镜下可见肿瘤细胞呈巢状排列,细胞成分相对单一,核浆比较大,细胞边界不清,核大小不等,呈圆形及卵圆形,染色质粗糙,核分裂像常见,偶见坏死。与模型组相比,各治疗组镜下细胞排列较稀疏,体积缩小,核浆比减少,部分细胞核固缩,可见泡状核和核周空晕,核分裂像较模型组少见,其中以PDT-姜黄素组最为明显。4.免疫组化结果：模型组Notch-1表达较高,与模型组相比,各组Notch-1表达均降低,有统计学意义(P0.01)。模型组NF-kB表达较低,其余各组较模型组相比,NF-KB表达均有统计差异(P0.01)。与姜黄素-PDT组相比,阻断剂组NF-kB表达显著下降,有统计差异(P0.05)。模型组VFGF表达较低,其余四个治疗组较模型组相比,表达均升高,有统计学差异(P0.01),其中姜黄素联合光动力治疗组表达最为显著(P0.01)。与姜黄素联合光动力治疗组相比,阻断剂组VEGF表达显著下降,有统计差异(P0.01)。5. Westen-blot结果：与模型组相比,姜黄素联合光动力治疗组Notch-1表达较模型组显著降低,有统计学差异(P0.01)。与姜黄素联合光动力治疗组相比,阻断剂组Notch-1表达升高,有统计差异(P0.01)。与模型组相比,姜黄素联合光动力治疗组NF-kB表达降低(P0.05)。与姜黄素联合光动力治疗组相比,阻断剂组NF-kB表达升高(P0.05)。与模型组相比,姜黄素联合光动力治疗组较模型局表达显著升高,具有统计学差异(P0.01),阻断剂组表达较模型组有所升,差异有统计学意义(P0.05)。与姜黄素-PDT组相比,阻断剂组VEGF表达有所降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论：1.光动力疗法对宫颈癌体外移植瘤具有抑制作用。2.治疗各组Notch-1表达均较模型组降低,提示抑制Notch-1的表达可能对肿瘤增长抑制作用。3. Notch-1/NF-KB/VEGF信号通路在宫颈癌中扮演重要角色。
【关键词】：宫颈癌 光动力治疗 姜黄素 Notch-1 NF-κB VEGF
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 中英文缩略词12-14
• 上篇 文献综述14-24
• 综述 光动力疗法治疗宫颈癌的研究进展14-24
• 1 宫颈癌严重危害妇女健康14
• 2 光动力疗法有望成为新的治疗手段14-15
• 2.1 光动力疗法的历史回顾14-15
• 2.2 光动力疗法的原理及特点15
• 2.3 光敏剂的发展15
• 3 光动力治疗宫颈癌的研究15-18
• 3.1 光动力治疗宫颈癌的可行性分析15-16
• 3.2 光动力治疗宫颈癌的相关研究16
• 3.3 光动力治疗宫颈癌的机制探究16-18
• 4 光动力治疗宫颈癌应用于临床的相关研究18
• 5 光动力治疗非肿瘤性疾病18-19
• 6 展望19-20
• 参考文献20-24
• 下篇 实验研究24-71
• 前言24-25
• 整体实验流程框架示意图25-26
• 实验一 姜黄素介导的光动力疗法对宫颈癌体外移植瘤的作用26-38
• 1 材料26-27
• 2 方法27-29
• 3 结果29-32
• 4 讨论32-35
• 5 结论35-36
• 参考文献36-38
• 实验二 姜黄素介导的光动力疗法对宫颈癌体外移植瘤中Notch-1表达情况的影响38-57
• 1 材料38-40
• 2 方法40-43
• 3 结果43-45
• 4 讨论45-51
• 5 结论51-52
• 参考文献52-57
• 实验三 姜黄素介导的光动力治疗宫颈癌体外移植瘤Notch-1下游NF-κB及VEGF的影响57-71
• 1 材料57
• 2 方法57-58
• 3 结果58-63
• 4 讨论63-67
• 5 结论67-68
• 参考文献68-71
• 结语71-72
• 致谢72-73
• 个人简历73-74
• 附图74

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本文编号：464260