早产胎盘miRNA表达谱构建及miR-182-5p在早产中作用的探讨

发布时间：2017-06-20 07:08

  本文关键词：早产胎盘miRNA表达谱构建及miR-182-5p在早产中作用的探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：早产(Preterm Birth,PTB)定义为孕期小于37周或从末次月经第一天开始计算少于259天分娩。早产在我国的发生率约为8%,并且有逐年上升的趋势,75%的围产儿死亡和50%的异常与早产有关,是围产儿发病和死亡的首要原因。早产的发生机制尚不完全清楚,目前认为,早产是多种因素相互作用所致的一种综合征,与遗传、感染、孕酮水平、多胎妊娠、宫颈长度、胎盘异常、年龄、营养状况、凝血因素等有关。近年来,研究发现微小RNA(microRNA,mi RNA)水平及基因3’非翻译区(3’-UTR)上mi RNA作用靶点序列多态与早产、先兆子痫、流产以及胎儿畸形等不良妊娠结局有关。本研究旨在构建早产胎盘差异表达的mi RNA图谱,筛选早产相关的mi RNA,并探讨其在早产中的作用。方法:2013年2月-2013年10月期间分娩的早产儿16例为病例组,同期健康足月产儿18例为对照组,取胎盘组织。通过非标记miRNA芯片技术构建早产胎盘组织mi RNA表达谱,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)进行验证。构建锌指E-box结合同源框2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)和人凝血因子XIIIA1多肽(Factor XIII A,F13A1)的psiCHECK2野生型和突变型的载体,通过双荧光素酶报告基因检测、原位杂交等方法探讨mi R-182-5p与ZEB2和F13A1基因的互作关系。结果:1.对照组胎盘和早产胎盘中有1138种miRNAs在胎盘中表达,其中miR-4251、mi R-517c-3p和mi R-23b-3p等mi RNAs在胎盘中表达最高,miR-1292-3p、mi R-4632-5p和miR-5787等mi RNAs表达最低。mi RNA芯片结果显示44种miRNAs在早产胎盘组织和对照组胎盘组织中差异表达,其中上调表达的33个,下调表达的11个,mi R-493-3p是下调表达倍数最多的miRNA,下调倍数为2.77倍,mi R-1322为上调表达最多的mi RNA,上调倍数为9.81。RT-PCR验证结果与芯片结果一致。2.实时荧光定量PCR结果显示mi R-182-5p在早产胎盘组织中表达水平显著增加,采用原位杂交结果显示mi R-182-5p在胎盘组织细胞质中广泛表达。3.采用在线软件预测mi R-182-5p的靶基因为ZEB2和F13A1。双荧光素酶活性实验结果显示在HTR-8/SVneo细胞中miR-182-5p直接作用于ZEB2和F13A1基因,并且起抑制作用。采用实时荧光定量PCR方法检测,与足月产胎盘相比,早产胎盘组织的ZEB2和F13A1的m RNA未见差异表达。结论:1.早产胎盘组织中存在差异表达的mi RNAs,这些差异表达的mi RNAs在早产中的功能还需要进一步的研究。2.mi R-182-5p在早产胎盘组织中表达上调,在离体细胞中mi R-182-5p对ZEB2和F13A1基因起抑制作用,但是在在体组织中,在mi R-182-5p增高的早产胎盘组织中,ZEB2和F13A1基因的m RNA水平未见显著差异。因此,在胎盘组织中mi R-182-5p并非通过直接降调ZEB2和F13A1 mRNA的水平参与早产的发生。
【关键词】：早产 mi RNA 芯片 双荧光素酶报告基因 mi R-182-5p ZEB2 F13A1
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.21
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分 早产胎盘micro RNA表达谱构建9-33
• 前言9-11
• 1.实验材料和试剂11-14
• 2.实验方法14-20
• 3.结果20-27
• 4.讨论27-29
• 参考文献29-33
• 第二部分 mi R-182-5p 在早产中作用的初步探讨33-68
• 前言33-35
• 1.实验材料和试剂35
• 2.实验方法35-53
• 3.结果53-63
• 4.讨论63-65
• 参考文献65-68
• 综述68-82
• 参考文献74-82
• 发表文章82-83
• 致谢83

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