磷酸二酯酶4B（PDE4B）在LPS诱导的早产中的作用探究

发布时间：2017-06-20 21:13

  本文关键词：磷酸二酯酶4B（PDE4B）在LPS诱导的早产中的作用探究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探究PDE4B在LPS诱导的早产中的作用及其实现促炎和促收缩双重作用的产生机制,为早产发病机制的完善和新型保胎药(PDE4B选择性抑制剂)的开发提供理论基础。方法：利用Pde4b基因敲除(KO)雌鼠及其同窝出生的野生型(WT)雌鼠,分别与杂合的雄鼠进行交配,雌鼠怀孕14d时腹腔注射LPS(400μg/kg)或PBS(100 μ1/10 g)作为溶媒对照,由此将实验动物分为四组：模型对照组(PBS-WT)、实验对照组(PBS-KO)、模型组(LPS-WT)和实验组(LPS-KO),分别统计每组雌鼠生产时的平均妊娠周期、早产率和胎死率；取小鼠生产当天的样本制作病理切片,通过HE染色或CD68免疫组化分别观察并统计每组样本子宫平滑肌中中性粒细胞和巨噬细胞的百分数。结果：在LPS诱导下,WT小鼠的早产率高达85.7%,胎死率84.4%；而KO小鼠的早产率和胎死率相比于WT组有明显下降(分别降至14.3%和55.3%)。LPS诱导下WT早产小鼠子宫平滑肌中性粒细胞的浸润明显增多,巨噬细胞数目也有上升趋势；KO小鼠子宫平滑肌中几乎没有中性粒细胞的浸润,相比于WT组巨噬细胞浸润也稍有减少。结论：建立了LPS诱导的早产模型,并在整体水平验证了PDE4B的缺失在预防早产和减少胎儿损伤中的作用,从而证明PDE4B可作为一个高效且安全的保胎药靶点。PDE4B的存在有助于炎症细胞在子宫平滑肌内的浸润,在炎症的发生发展中具有重要作用；PDE4B在介导LPS诱导的子宫平滑肌收缩中的作用和具体机制仍有待进一步的探究。
【关键词】：磷酸二酯酶4B 早产 子宫平滑肌 脂多糖 炎症 收缩
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.21
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 缩略词表8-14
• 1 绪论14-32
• 1.1 子宫结构和功能简介14-16
• 1.1.1 子宫外膜14-15
• 1.1.2 子宫内膜15
• 1.1.3 子宫平滑肌15-16
• 1.2 早产发生的分子机制16-22
• 1.2.1 子宫平滑肌的超微结构及收缩的形成机制17-18
• 1.2.2 子宫收缩的调节机制18-22
• 1.3 炎症细胞在子宫平滑肌中的浸润及其功能的探讨22-24
• 1.3.1 巨噬细胞22-24
• 1.3.2 中性粒细胞(neutrophils)24
• 1.4 子宫平滑肌中存在的主要PDEs简介24-27
• 1.4.1 PDE1,PDE2和PDE325
• 1.4.2 PDE425-26
• 1.4.3 PDE526-27
• 1.5 PDE4在启动早产中的作用：课题研究现状27-28
• 1.6 本课题研究思路和基本内容28-32
• 1.6.1 Pde4b基因敲除小鼠简介28-29
• 1.6.2 早产模型的建立29-30
• 1.6.3 实验的取材30
• 1.6.4 子宫平滑肌收缩的测定方法30-32
• 2 整体实验：Pde4b敲除对LPS诱导的小鼠早产的预防作用32-50
• 2.1 实验器材与试剂32-34
• 2.1.1 实验动物32
• 2.1.2 实验器材32-33
• 2.1.3 实验试剂33-34
• 2.2 实验方法34-41
• 2.2.1 Pde4b基因敲除小鼠基因型鉴定方法的建立34-36
• 2.2.2 LPS诱导的小鼠早产模型的建立以及早产率和胎死率的统计36-38
• 2.2.3 小鼠子宫病理切片的制作38-39
• 2.2.4 小鼠子宫病理切片的HE染色和中性粒细胞的统计方法39-40
• 2.2.5 小鼠子宫病理切片的免疫组化和巨噬细胞的统计方法40-41
• 2.2.6 实验结果的统计学分析41
• 2.3 实验结果41-47
• 2.3.1 Pde4b基因敲除小鼠基因型鉴定方法的建立41-42
• 2.3.2 LPS诱导的小鼠早产模型的建立及Pde4b敲除对早产的预防作用42-44
• 2.3.3 早产模型小鼠子宫平滑肌中性粒细胞浸润情况及Pde4b敲除对其的影响44-45
• 2.3.4 早产模型小鼠子宫平滑肌巨噬细胞浸润情况及Pde4b敲除对其的影响45-47
• 2.4 讨论47-50
• 3 结论50-51
• 参考文献51-58
• 附录58-61
• 作者简历61

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